TGF-β-,1--Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在慢性盆腔炎中的作用及機制.pdf

1、一、研究背景。 慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease,CPID)是婦科常見病,其病因和發(fā)病機制尚未完全闡明。此病纏綿難愈,易反復(fù)發(fā)作導(dǎo)致異位妊娠、輸卵管性不孕、輸卵管卵巢膿腫、積水、盆腔粘連性疾病、慢性盆腔疼痛和月經(jīng)不調(diào)等,嚴(yán)重影響婦女的身心健康,使病人在精神上和經(jīng)濟上都付出巨大的代價。 研究表明：在慢性炎癥過程中,自始至終伴有細胞因子的異常表達。頑固的細胞因子活化和伴隨而來

2、的組織損傷形成惡性循環(huán),這是慢性炎癥中最難解決的問題,而細胞因子與炎癥細胞的滲出、激活炎癥病理性損傷、成纖維細胞的增殖等密切相關(guān),直接或間接影響炎癥的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后。從目前研究進展來看,慢性炎癥的發(fā)生、發(fā)展與細胞因子的異常表達關(guān)系密切,其病理變化由細胞因子介導(dǎo),同時細胞因子在慢性炎癥過程中具有雙重效應(yīng),一方面,它導(dǎo)致并促進炎癥發(fā)展；另一方面,它又可抑制炎癥的發(fā)展。 TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活既可表現(xiàn)為促炎效應(yīng),也

3、會是抑炎效應(yīng),這種差別可能取決于不同的細胞和背景環(huán)境。(1) TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的抑炎效應(yīng):TGF-β1/Smads基因敲除小鼠表現(xiàn)為全身多器官的過度炎癥反應(yīng)和早期死亡。TGF-β1/Smads信號的破壞也會引起一些自身免疫性疾病和諸如炎性腸病、哮喘之類的慢性炎癥。(2)TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的促炎效應(yīng):TGF-β：是中性粒細胞、單核細胞的有力趨化劑。TGF-β1的過度表達或給予外源性TGF-β1可以

4、加引發(fā)炎癥或加重炎癥反應(yīng)。而阻斷Smad3信號可減輕炎癥反應(yīng)。(3) TGF-β1/Sma ds信號和促(抑)炎細胞因子存在著相互調(diào)節(jié)。(4) TGF-β1/Smads信號通路與NF-xB信號通路、JAK/STAT,MAPK信號通路等炎癥相關(guān)信號通路存在著密切的交互作用。有關(guān)TGF-β1/Smad s信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與慢性盆腔炎關(guān)系的研究較少。近年來，李華濤在嚴(yán)重?zé)齻笫竽Ｐ偷难芯恐邪l(fā)現(xiàn)TGF-β1/Smads信號通路的特異性抑制劑SB43

5、1542在進一步降低磷酸化Smad2/3水平同時,可以顯著降低燒傷后促炎性細胞因子TNF a、IL-10、IL-6和細胞粘附分子ICAM-1,E-Selectin,CDIIb的表達。 二、研究目的。 1.觀察TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵中介蛋白Smad2/3在慢性盆腔炎的活化狀態(tài),了解TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)節(jié)慢性盆腔炎的病理生理變化。 2.觀察TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

6、通路對慢性盆腔炎TNFa,IL-10,IL-6和ICAM-1表達的調(diào)節(jié)作用。從炎癥級聯(lián)反應(yīng)的兩個中心環(huán)節(jié)(促炎細胞因子的產(chǎn)生和細胞粘附分子介導(dǎo)的中性粒細胞與血管內(nèi)皮細胞的粘附激活)切入,闡明TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對慢性盆腔炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用。 3.觀察TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對慢性盆腔炎子宮內(nèi)膜病理形態(tài)方面的改變,以了解TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對慢性盆腔炎病變組織的調(diào)節(jié)作用。 三、研

7、究內(nèi)容。 第一部分：慢性盆腔炎動物模型的建立。本實驗建立了慢性盆腔炎動物模型,通過病理學(xué)、免疫學(xué)、細菌學(xué)技術(shù),動態(tài)觀察其慢性炎癥的病變過程。發(fā)現(xiàn)慢性盆腔炎階段的病變組織內(nèi)已無細菌存活,但菌體抗原持續(xù)存在的情況下,病變組織損傷進行性加重。該模型造模方法、感染方式、傳播途徑、病變特點與人類慢性盆腔炎相似。 第二部分：慢性盆腔炎TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化。健康成年的雌性Sprague-Dawley大鼠,隨機分為

8、正常對照組((N組)12只,慢性盆腔炎組(B組)36只、慢性盆腔炎+SB431542組(D組)36只。分別于造模術(shù)后第40天,第50天,第60天,各取N組4只,B、D組各12只實驗大鼠處死刨取子宮組織。RNA,RT-PCR法測定TGF-β1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平。Western Blot印跡分析Phospho-Smad2/3,Smad3的活性。 第三部分：TGF-β1/Smads信號通路對慢性盆腔炎促炎細胞因子和細胞粘附分子表達的調(diào)

9、節(jié)作用。通過實驗，采用染料攝入法檢測大鼠腹腔巨噬細胞分泌TNF的能力，以及進行HE染色及免疫組化檢測大鼠子宮組織中Ⅲ、IV型膠原及FN蛋白表達方法(二步法)。 四、研究結(jié)果。 1.子宮組織TGF-β1mRNA表達慢性盆腔炎組造模術(shù)后40天、50天、60天均顯著高于正常組(P<0.01)(圖2-2,表2-1)。但模型+SB431542組卻顯著低于同時相點模型組(P<0.01)。模型+SB431542組與正常組相比較沒有顯著

10、性差異(P>0.05)。不同時間點模型組之間比較均沒有統(tǒng)計學(xué)意義,不同時間點模型+SB431542組之間比較亦沒有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.子宮組織phospho-Smad2/3、Smad3蛋白免疫印跡檢測結(jié)果2.1 子宮組織phospho-Smad2/3蛋白表達慢性盆腔炎組造模術(shù)后40天、50天、60天phospho-Smad2/3蛋白表達均顯著高于正常對照組(P<0.01)。模型組+SB431542組phosph-Smad2/3蛋白

11、表達顯著低于同一時間點的模型組(P<0.01)。(圖2-3,表2-2),模型組+SB431542組與正常組比較沒有明顯著性差異(P>0.01)。結(jié)果同子宮組織TGF-β1mRNA的表達結(jié)果是一致的。 3.HE染色結(jié)果各時間點模型+SB431542組子宮組織病理評分雖然仍顯著高于正常組,但與模型組相比卻有顯著降低。 五、研究結(jié)論。 1.建立了慢性盆腔炎動物模型,動態(tài)觀察其慢性炎癥的病變過程。發(fā)現(xiàn)慢性盆腔炎階段的病變

12、組織內(nèi)已無細菌存活,但菌體抗原持續(xù)存在的情況下,病變組織損傷進行性加重。該模型造模方法、感染方式、傳播途徑、病變特點與人類慢性盆腔炎相似。 2.各模型組大鼠子宮組織中TGF-β1,Smad3表達均明顯增加,且二者的表達指數(shù)顯著正相關(guān)。反映慢性盆腔炎中TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路呈激活狀態(tài)。 3.TGF-β1/Smads信號通路的特異性抑制劑SB431542可以顯著降低慢性盆腔炎促炎性細胞因子TNF a、IL-10