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文檔簡(jiǎn)介
1、 目的:對(duì)4條不同的DNA條形碼(matK、trnL-trnF、rpoC1、IT S)和組合進(jìn)行篩選,尋找能夠快速、有效、可靠地鑒別重樓與其常見(jiàn)近緣種及市售商品重樓的DNA條形碼或組合。力圖發(fā)現(xiàn)重樓這一珍稀藥用植物的替代資源,為補(bǔ)充和完善重樓屬DNA條形碼方面的研究提供方法的參考。
方法:使用matK、trnL-trnF、rpoC1和核ITS的通用引物對(duì)采集的32個(gè)樣品材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,比較各序列擴(kuò)增和測(cè)序效率、種
2、內(nèi)和種間變異,進(jìn)行 barcoding gap 分析,以此評(píng)價(jià)各序列對(duì)采自云南、四川的重樓藥材和購(gòu)自市場(chǎng)的商品重樓的鑒別能力。
結(jié)果:
1.ITS、matK、rpoC1、trnL-trnF序列作為鑒定重樓與常見(jiàn)混偽品及其商品藥材的DNA條形碼候選序列,其擴(kuò)增效率都能達(dá)到100%,ITS測(cè)序成功率達(dá)到了100%,trnL-trnF、matK序列的測(cè)序成功率分別為9 6%、82%,rpoC1序列的測(cè)序成功率能達(dá)到70
3、%。
2.ITS序列提供了最大種間變異且Wilcoxon檢驗(yàn)表明其種間最小變異明顯大于其種內(nèi)最大變異,較有利于物種的鑒別;barcoding gap與其他DNA條形碼候選序列相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
3.在鑒定效率方面,ITS序列對(duì)重樓與其商品藥材的鑒別效率最高,為96.2%。ITS+trnL-trnF組合序列在對(duì)親緣關(guān)系很近的易混品材料的鑒別效率能達(dá)到100%。
4.基于ITS、ITS+trnL-trn
4、F構(gòu)建的樹(shù)中,親緣關(guān)系近的都各聚一支,且市購(gòu)的10個(gè)商品重樓樣本中,商品藥材3與華重樓首先聚在一起,提示其與華重樓有較近的親緣關(guān)系,而商品藥材4與云南重樓親緣關(guān)系較近,商品藥材1與花葉重樓的親緣關(guān)系較近,商品藥材2與拳參一起聚在重樓屬物種的外圍,據(jù)此可鑒別商品藥材2是偽品。
結(jié)論:ITS 序列可以作為鑒定重樓與其常見(jiàn)近緣種及市售商品藥材的 DNA 條形碼候選序列,同時(shí)我們推薦 ITS+trnL-trnF 組合序列作為其補(bǔ)充序
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