2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  1.實驗室自制竹紅菌素修飾的納米脂質(zhì)微泡,并測定其粒徑大小、電位、包封率等物理性質(zhì);將HB溶于DMSO中,用UV-2102PC紫外分光光度計檢測,確定檢測波長。
  2.常規(guī)培養(yǎng)人舌癌細(xì)胞,觀察竹紅菌素修飾納米脂質(zhì)微泡在細(xì)胞中的吸收代謝規(guī)律,選定最佳時間,而后聯(lián)合LED光源照射觀察對癌細(xì)胞的作用。
  方法:
  第一部分1.制作微泡實驗室機(jī)械振蕩法自制竹紅菌素修飾納米脂質(zhì)微泡以及空白微泡,分別用馬爾

2、文激光粒徑測量儀、Malvern表面電位檢測儀、UV-2102PC紫外分光光度計側(cè)定其粒徑、電位、包封率。2.實驗室配置成溶劑為DMSO,溶質(zhì)為HB,濃度為1mg/ml的棕黃色液體,加入到100ml含5%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,稀釋成HB終濃度為0.5μM,用UV-2102PC紫外分光光度計在波長400nm-700nm范圍內(nèi)連續(xù)掃描,可得出HB的吸收光譜圖,選取最高值作為后續(xù)實驗條件。
  第二部分1.細(xì)胞培養(yǎng)在含5

3、%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中常規(guī)培養(yǎng)Tca8113細(xì)胞。2.竹紅菌素修飾脂質(zhì)微泡的吸收代謝規(guī)律取對數(shù)生長期的Tca8113細(xì)胞,加入含20μM納米光敏劑的RPMI1640,分別培養(yǎng)2h,4h,6h,8h,10h,12h,PBS沖洗兩次,離心兩次后用DMSO裂解細(xì)胞,放置30分鐘。用分光光度計檢測熒光值,激發(fā)波長為475nm,發(fā)射波長為600nm。3.觀察HB修飾脂質(zhì)微泡聯(lián)合LED光源照射對細(xì)胞Tca8113的作用于96孔板中加

4、入處于對數(shù)生長期的Tca8113細(xì)胞,每孔2*104個細(xì)胞,每組設(shè)3個復(fù)孔,將細(xì)胞培養(yǎng)到次日加入HB修飾的微泡,濃度為0-10μmol/L。孵育6小時后在暗室內(nèi)進(jìn)行光照處理,能量密度為0-3J/cm2,波長為475nm,繼續(xù)培養(yǎng)18小時,用MTT法檢測各孔吸光度值OD值,按照以下公式計算各組細(xì)胞的抑制率,細(xì)胞抑制率(%)-(對照組的OD-處理組的OD值)/對照組的OD值*100%,所有實驗數(shù)據(jù)重復(fù)計算三次。4.流式觀察HB修飾脂質(zhì)微泡聯(lián)

5、合LED光源照射對細(xì)胞Tca8113的作用將細(xì)胞分成五組,①實驗細(xì)胞組:HB微泡濃度10μM,光能量為3 J/cm2;②空白對照組:HB微泡濃度0μM,光能量為0J/cm2;③單純光照組:HB微泡濃度0μM,光能量為3J/cm2;④單純HB微泡組:HB微泡濃度10μM,光能量為0J/cm2;⑤空白微泡組:空白微泡濃度10μM,光能量為3J/cm2;各組按分組要求微泡處理6h后,再光照18h后按要求對細(xì)胞AnnexinV-FITC/PI進(jìn)

6、行雙染,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。
  結(jié)果:
  第一部分1.竹紅菌素修飾的微泡為納米級,其粒徑為(1050.4±323.0)nm,Zeta電位為+(21.3±7.3)mV,包封率為(85.1±4.6)%;空白微泡粒徑為(1029.8±134.0)nm,Zeta電位為+(20.9±8.6)mV。
  2.竹紅菌乙素在吸收光譜圖上有三個吸收峰,分別為475nm、545nm,在475nm處為最高峰值。
  第二部分

7、1.細(xì)胞中竹紅菌素脂質(zhì)微泡吸收隨時間變化而變化,6小時達(dá)最佳,6小時后細(xì)胞內(nèi)竹紅菌素的含量呈平臺且有下降趨勢。
  2.HB微泡聯(lián)合LED光源照射細(xì)胞有明顯抑制作用,在一定范圍內(nèi)抑制作用跟HB微泡濃度呈整相關(guān)。
  3.除實驗細(xì)胞組以外,其余四組凋亡率及死亡率較低,無明顯差異(p>0.05),其中空白微泡組凋亡率及其死亡率稍高,但仍無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗細(xì)胞組凋亡率及其死亡率較高,較其余四組有明顯差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.0

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