PS341對(duì)小鼠急性重癥胰腺炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、急性胰腺炎(AP)是指胰腺消化酶被激活后對(duì)本器官自身及其周圍臟器產(chǎn)生消化作用而引起的全身性炎癥性疾病。根據(jù)病理變化可分為急性水腫性胰腺炎和急性出血性胰腺炎。其中急性出血性胰腺炎由于其發(fā)病急，進(jìn)展快，是臨床常見的危重病，所以又叫急性重癥胰腺炎(SAP)?；颊咴缙诩纯沙霈F(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)及多器官功能不全(MODS)，死亡率高達(dá)20-30％。但是其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。近年來，由于生活水平的改善，我國(guó)胰腺炎的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，同

2、時(shí)SAP所占比例也在增加。尋找有效的治療藥物，提高SAP的存活率，一直是臨床研究的熱點(diǎn)。 目前對(duì)于SAP的發(fā)病機(jī)制主要有以下幾種學(xué)說：經(jīng)典的膽道阻塞學(xué)說、“白細(xì)胞過度激活，多種細(xì)胞因子和炎癥遞質(zhì)級(jí)反應(yīng)學(xué)說”、“胰腺缺血、微循環(huán)障礙學(xué)說”、“腸道細(xì)菌移位—胰腺組織繼發(fā)感染學(xué)說”等。1988年Rindemecht提出“白細(xì)胞過度激活，多種細(xì)胞因子和炎癥遞質(zhì)級(jí)反應(yīng)學(xué)說”，該學(xué)說認(rèn)為AP病情加重，引發(fā)多臟器損傷，部分與胰酶自身消化有關(guān)，

3、但單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞介入的多種細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)在其中起主導(dǎo)作用。SAP時(shí)，單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)、中性粒細(xì)胞均被過度激活，產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)；它們不僅于胰腺局部，還擴(kuò)展至全身，并通過級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引發(fā)更多的細(xì)胞和細(xì)胞因子連鎖反應(yīng)，造成SIRS和MODS。上述各種學(xué)說的提出，都能說明AP發(fā)病的某一方面。對(duì)于細(xì)胞因子介入AP發(fā)病的認(rèn)知，希望能夠通過調(diào)整或抑制某些細(xì)胞因子的釋放來治療AP。但是對(duì)于某些細(xì)胞因子的特異性抑制，很難

4、阻斷眾多炎癥因子共同參與的“瀑布樣“級(jí)聯(lián)反應(yīng)。研究顯示，作為多種細(xì)胞因子表達(dá)的上游調(diào)節(jié)因子，NF-κB是一個(gè)理想的用藥目標(biāo)。平時(shí)NF-κB與IκB結(jié)合，以失活的形式存在，當(dāng)細(xì)胞外炎癥信號(hào)引發(fā)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體(Proteasome)降解IκB，釋放出的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)并產(chǎn)生多種細(xì)胞因子。PS341是一種蛋白酶體的特異性抑制劑。PS341通過抑制蛋白酶體，使NF-κB以失活的形式存在，以阻斷炎癥因子的產(chǎn)生，抑制SAP的發(fā)病過程。

5、 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腹腔聯(lián)合注射蛙皮素(Cn)和脂多糖(LPS)，制作小鼠SAP模型，并用PS341進(jìn)行治療，觀察各組小鼠血清淀粉酶、C反應(yīng)蛋白(CRP)、乳酸脫氫酶(LDH)等指標(biāo)及病理變化的差異，觀察PS341的治療作用。 實(shí)驗(yàn)方法 1.動(dòng)物來源：清潔級(jí)雌性ICR小鼠24只，體重20±1.5g,由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房提供。 2.實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分三組：生理鹽水制模組、二甲基亞砜(DMSO)對(duì)照組、PS341治療組。

6、 3.制模前12小時(shí)小鼠禁食不禁飲。 4.動(dòng)物模型制作： 1)生理鹽水制模組：清潔級(jí)雌性ICR小鼠腹腔注射制模用生理鹽水(10ml/kg)7次，每次間隔1h，第六次注射雙倍生理鹽水。DMSO(10ml/kg)在首次注射生理鹽水后4.5h腹腔注射。 2)DMSO對(duì)照組：采用Cn和LPS聯(lián)合腹腔注射制作小鼠SAP模型。清潔級(jí)雌性ICR小鼠腹腔注射Cn(5mg/l，10ml/kg)7次，每次間隔1h，第六次同時(shí)注

7、射LPS(0.1％，10ml/kg)。DMSO(10ml/kg)在首次注射Cn后4.5h腹腔注射。 3)PS341治療組：采用Cn和LPS聯(lián)合腹腔注射制作小鼠SAP模型。清潔級(jí)雌性ICR小鼠腹腔注射Cn(5mg/l，10ml/kg)7次，每次間隔1h，第六次同時(shí)注射LPS(0.1％，10ml/kg)。PS341(0.05g/l，10ml/kg)在首次注射Cn后4.5h腹腔注射。 5.小鼠麻醉后，采用頸動(dòng)脈取血，取胰腺標(biāo)本