BHK21細(xì)胞懸浮培養(yǎng)液篩選及高效價O型口蹄疫生產(chǎn)種毒的制備.pdf

1、為了實現(xiàn)規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化，達(dá)到精密控制生產(chǎn)過程，降低生產(chǎn)成本，便于下游工作及提高生物制品的質(zhì)量以及安全性，就需要不斷改進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，篩選適宜的細(xì)胞培養(yǎng)基。本文通過細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞可利用率等指標(biāo)篩選適宜的培養(yǎng)基來提高BHK21細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量，進(jìn)一步通過毒價和146S篩選出適應(yīng)該細(xì)胞敏感的高效價、穩(wěn)定的優(yōu)良的口蹄疫O型種毒。
　　將BHK21種細(xì)胞分別接種到A、B、C三種培養(yǎng)液中，進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞凋亡

2、情況和細(xì)胞可利用率等指標(biāo)，篩選出適合該細(xì)胞生長的培養(yǎng)液，結(jié)果表明:對該種細(xì)胞懸浮培養(yǎng)32 h、36h和48h，其在培養(yǎng)液A中細(xì)胞凋亡總數(shù)占比保持在3.5％～8.2％之間，低于培養(yǎng)液C，遠(yuǎn)低于培養(yǎng)液B，即細(xì)胞凋亡一直處于較低水平，生長狀態(tài)保持平穩(wěn)。該種細(xì)胞懸浮培養(yǎng)10 h、34 h和48 h，其在培養(yǎng)液A中細(xì)胞可利用率在97％～98％之間，高于培養(yǎng)液B和C。因此該種細(xì)胞更適宜在培養(yǎng)液A中生長代謝。
　　對口蹄疫O/Mya98/201

3、0種毒進(jìn)行馴化，測定各個代次的毒價和146S，最終篩選出最佳代次。貼壁轉(zhuǎn)瓶毒BF9代可作為生產(chǎn)種毒用來進(jìn)行懸浮毒的馴化，懸浮毒BF11代可作為做生產(chǎn)種毒進(jìn)行懸浮的放大。
　　選擇第一次傳代的BF11代作為生產(chǎn)種毒進(jìn)行放大培養(yǎng)。對懸浮毒進(jìn)行50L反應(yīng)器放大培養(yǎng)，經(jīng)檢測TCID50平均為10-7.5/0.1mL，146S平均為3.81μg/mL，較以前得到明顯提高（TCID50為10-70/0.1mL，146S為1.2～1.5μg/m