腺苷A2A受體阻斷劑SCH58261對大鼠杏仁核點燃癲癇模型的影響及作用機制研究.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分
　　第一部分
　　腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對大鼠杏仁核點燃癲癇模型的影響
　　目的:目前臨床上仍有20％-30％的癲癇患者藥物治療效果較差,不能很好的控制癲癇發(fā)作,這部分患者的發(fā)作類型主要是顳葉癲癇,因此仍需研究新的抗癲癇藥物。杏仁核電點燃模型是模擬人類顳葉癲癇最好的癲癇模型,且對現(xiàn)有的大部分抗癲癇藥物耐藥。因此應(yīng)用點燃模型在動物體內(nèi)研究藥物是否具有抗癲癇作用可以為以后的臨床藥物治療

2、提供理論基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn),腺苷 A2A受體阻斷劑在很多慢性疾病模型中如帕金森病模型可以長時間發(fā)揮作用,但是它在不同的癲癇模型中的作用存在爭議,在此基礎(chǔ)上,本實驗研究腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對大鼠杏仁核點燃癲癇模型的作用及對點燃進程的影響。
　　方法:將電極植入 Wistar大鼠右側(cè)杏仁核,每天給予500μA的電流刺激,大鼠連續(xù)十天在刺激后達到5級發(fā)作視為點燃成功。點燃成功后的大鼠,通過腹腔給藥的方法,觀察 SC

3、H58261對模型成功后各發(fā)作參數(shù)的作用。除此之外,觀察藥物對杏仁核點燃進程的影響,每天刺激前30min給予 SCH58261,記錄大鼠每天發(fā)作級數(shù)及腦電變化。整個實驗過程中,嚴密觀察藥物對大鼠行為學的影響。
　　結(jié)果:在成功點燃的癲癇模型中,SCH58261(0.005,0.05,0.5mg/kg)對全面性發(fā)作閾值(GST)沒有影響。以 GST(+4μA)為刺激強度,SCH58261(0.005,0.05mg/kg)可以降低杏仁

4、核后放電時間(ADD),運動性發(fā)作持續(xù)時間(MSD),5級發(fā)作持續(xù)時間(S5D)和癲癇發(fā)作總的持續(xù)時間(SD);SCH58261(0.005,0.05mg/kg)對癲癇4級發(fā)作潛伏期(S4L)和癲癇發(fā)作狀態(tài)(SS)沒有影響;SCH58261(0.5mg/kg)對點燃模型各發(fā)作參數(shù)均無抑制作用。以2×GST為刺激強度,SCH58261(0.05mg/kg)對ADD和S5D均無明顯抑制作用,但可以降低 MSD和SD發(fā)作時間。SCH58261

5、(0.005,0.05,0.5mg/kg)不影響杏仁核點燃癲癇模型進程。
　　結(jié)論:SCH58261在0.005-0.05mg/kg范圍內(nèi)不能影響杏仁核癲癇模型點燃進程,但可以抑制模型點燃成功后癇性發(fā)作。
　　第二部分
　　腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對大鼠杏仁核點燃癲癇模型海馬損傷的作用及機制研究
　　目的:臨床很多顳葉癲癇患者及顳葉癲癇動物模型中都發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元缺失,并與癲癇反復(fù)發(fā)作有相關(guān)性。減輕

6、海馬神經(jīng)元損傷對治療癲癇有一定作用。MAPK信號通路與癲癇的關(guān)系密切,并且參與細胞生長分化的很多過程,同時它也是腺苷 A2A受體的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。本部分實驗在此基礎(chǔ)上,研究杏仁核點燃癲癇模型海馬損傷情況及腺苷 A2A受體阻斷劑 SCH58261對其保護作用以及與 MAPKs的關(guān)系。
　　方法:將電極植入 Wistar大鼠右側(cè)杏仁核,每天給予500μA的電流刺激,大鼠連續(xù)10天在刺激后達到5級發(fā)作視為點燃成功。SCH58261

7、干預(yù)的大鼠,在每天刺激前30分鐘腹腔注射0.05mg/kg藥物。成功點燃的大鼠,在最后一次5級發(fā)作后2小時處死,尼氏染色法觀察各組海馬神經(jīng)元損傷情況,Western blot檢測海馬 JNK、p-JNK、p38、p-p38、ERK、p-ERK的表達,免疫組化法觀察 p-JNK、p-p38的表達部位。
　　結(jié)果:尼氏染色結(jié)果顯示杏仁核點燃大鼠刺激側(cè)海馬 CA3區(qū)有神經(jīng)元損傷,腹腔注射 SCH58261對神經(jīng)元損傷有保護作用。假手術(shù)組

8、、點燃模型組及SCH58261組海馬CA3區(qū)正常形態(tài)神經(jīng)元計數(shù)分別為36.0±2.6,,22.2±1.9,31.2±1.9;各組間差別有統(tǒng)計學意義。Western blot及免疫組化方法顯示刺激側(cè)海馬 CA3區(qū) p-JNK、p-p38表達明顯增多,SCH58261對其有抑制作用;杏仁核點燃不影響 p-ERK的表達。
　　結(jié)論:腹腔注射 SCH58261可以減輕杏仁核點燃模型海馬 CA3區(qū)神經(jīng)元的損傷,其機制可能是通過抑制JNK、p