蠶蛹蛋白肽的制備及其功能活性研究.pdf

1、蛋白質是由各種氨基酸相互聯(lián)接而構成的具有空間結構的生物大分子，其理化性質和功能特性直接相聯(lián)系。蛋白質改性就是用生化因素或物理因素使氨基酸和多肽鏈發(fā)生某種變化，引起蛋白質大分子空間結構和理化性質的改變，從而獲得較好功能特性和營養(yǎng)特性的蛋白質。 肽是由兩個以上的氨基酸分子聯(lián)結而成，是構成蛋白質的結構片段，也是蛋白質發(fā)揮作用的活性基因部分，是機體完成免疫功能和進行免疫調節(jié)的重要活性物質。生物活性肽指能夠調節(jié)生物機體的生命活動或具有某些

2、生理活性作用的一類肽的總稱，大多以非活性狀態(tài)存在于蛋白質長鏈中，當被酶解成適當的長度時，它們的生理活性才會表現(xiàn)出來。 蠶蛹(silkworm pupa)是家蠶(Antherea pernyi Guerin-Meneville)生命周期的一個階段，蠶蛹蛋白與蠶蛹肽含有60％以上的人體必須氨基酸，還富含多種營養(yǎng)素，具有補充機體營養(yǎng)、促進生長發(fā)育、抗疲勞、抗衰老、提高人體免疫力等多種功能。本文主要對超臨界CO<,2>萃取技術提取蠶蛹油

3、制備蠶蛹蛋白粉的最佳工藝條件進行了研究，以得到的蠶蛹蛋白粉為原料進行蠶蛹蛋白肽的最佳酶解條件研究，并對蠶蛹蛋白肽進行分離純化、分子量測定及功能活性研究。 首先進行蠶蛹蛋白粉的制備，采用超臨界CO<,2>萃取技術對蠶蛹進行脫脂處理，以蠶蛹油提取率為指標，采用三因素三水平正交試驗設計確定超臨界CO<,2>萃取蠶蛹油的最佳工藝條件為：萃取溫度45℃，壓力25MPa，時間180min。蠶蛹油提取率為95.99％。 蠶蛹蛋白肽的水

4、解過程中，首先進行酶的篩選，在各自的最適條件下進行酶解，以水解度(DH)為指標，確定了最佳酶制劑為2709堿性蛋白酶。試驗考察了pH值、時間、溫度、固液比、加酶量對水解蠶蛹蛋白肽的影響，在單因素試驗的基礎上，采用L<,16>(4<'5>)正交試驗確定了蠶蛹蛋白肽的最佳酶解工藝條件為：溫度為55℃，時間為2.5h，固液比為1:7，pH值為8，酶與底物比為7％。蠶蛹蛋白肽的水解度為29.97％。 由于在酶解過程中，為了保持其在最適p

5、H值范圍內，需加入酸、堿，產生了大量的鹽，而且得到的蠶蛹蛋白肽顏色較深，蠶蛹蛋白肽需精制處理。通過添加3％活性碳進行脫色、脫苦，可獲得色清、味好的蠶蛹蛋白肽。通過陰陽離子交換樹脂可除去91.20％的鹽分。 試驗對精制后的蠶蛹蛋白肽理化性質和功能活性進行了研究，通過凝膠過濾層析技術得到蠶蛹蛋白水解液的洗脫曲線為一單一對稱峰，說明水解液的多肽純度較高、是由分子量接近的多肽組成的。通過SDS-PAGE電泳法檢測分子量分布，發(fā)現(xiàn)蠶蛹肽分