姜黃素對神經(jīng)病理性疼痛大鼠鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　觀察姜黃素(Curmin，Cur)對部分坐骨神經(jīng)損傷(SNI)大鼠痛行為的影響，并探索其內(nèi)在機(jī)制與CCL2/CCR2通路的相關(guān)性。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　1.神經(jīng)病理性疼痛SNI大鼠疼痛穩(wěn)定性觀察:雄性SD大鼠20只，基礎(chǔ)痛閾值篩選后大鼠隨機(jī)分為正常對照組和SNI模型組，疼痛行為學(xué)評價(jià):SNI大鼠術(shù)后3d、7d、12d、18d、25d、28d、32d、39d的50％機(jī)械撤足閾值(PWT)。
　　2.

2、SNI大鼠不同時(shí)間點(diǎn)對脊髓背角CCL2表達(dá)水平的變化:分別取SNI術(shù)后第3d、7d、12d、18d、28d及正常對照組大鼠（每組各三只）術(shù)側(cè)脊髓背角，用Western bloting實(shí)驗(yàn)方法檢測脊髓背角趨化因子CCL2的表達(dá)水平。
　　3.姜黃素對SNI大鼠鎮(zhèn)痛療效觀察及鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制探討:雄性SD大鼠40只，基礎(chǔ)痛閾值篩選后大鼠隨機(jī)均分為六組分別為:正常對照組，SNI溶劑(SNI)組，模型給藥低劑量組(SNI+Cur15)、模型

3、給藥中劑量組(SNI+Cur25)、模型給藥高劑量組(SNI+Cur50)及模型普瑞巴林組(SNI+PGB)，除正常對照組外，其余組均建立SNI模型。術(shù)后第7天評價(jià)造模成功后，模型給藥低、中、高劑量組大鼠分別腹腔注射15mg/kg、25mg/kg、50mg/kg的姜黃素溶液，SNI溶劑組給予等體積的溶劑(7％DMSO+2％TW80);普瑞巴林組大鼠每日灌胃給藥15mg/kg。每日給藥2次，連續(xù)給藥14d。療效評價(jià):六組大鼠造模前及術(shù)后7

4、d、8d，9d、12d、15d、18d、21d測定PWT值。機(jī)制探討:術(shù)后第21d行為學(xué)測試后取正常對照組，SNI溶劑組和SNI+Cur組(25mg/kg，bid，14d)術(shù)側(cè)脊髓背角，術(shù)側(cè)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)、坐骨神經(jīng)殘端及血清標(biāo)本，用Western bloting方法檢測脊髓背角趨化因子CCL2、CCR2、IBa1的表達(dá)水平及DRG趨化因子CCL2的表達(dá)水平。ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測坐骨神經(jīng)殘端及血清中CCL2表達(dá)水平。
　　實(shí)

5、驗(yàn)結(jié)果:
　　1.SNI大鼠術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)PWT值比較:SNI模型術(shù)側(cè)后肢于術(shù)后第3d PWT值明顯下降;術(shù)后第7d，PWT值穩(wěn)定在2g左右，疼痛持續(xù)時(shí)間長，穩(wěn)定性好;SNI組大鼠術(shù)側(cè)后肢于術(shù)后第3d、7d、12d、18d、25d、28d、32d、39d的PWT值與正常對照組比較明顯降低（p值均＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.Western bloting方法檢測SNI術(shù)后第3d、18d脊髓背角趨化因子CCL2的表達(dá)水

6、平較正常對照大鼠明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;術(shù)后第7d，第12d及第28d CCL2的表達(dá)水平較正常對照組大鼠稍有升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.姜黃素對SNI大鼠鎮(zhèn)痛療效觀察及機(jī)制探討。
　　3.1療效觀察:
　　術(shù)后第10d，SNI+cur25組、SNI+cur50組、SNI+PGB組較SNI溶劑組大鼠的PWT明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SNI+cur25組大鼠的PWT值分別與SNI+cur50組大鼠、SNI+PGB組大鼠

7、相比，PWT值無明顯差異。
　　術(shù)后第14d，SNI+cur15組大鼠較SNI溶劑組的PWT值顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　術(shù)后第19d，SNI+cur25組大鼠較SNI+cur15組的PWT值顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SNI+cur25組大鼠的PWT值與SNI+cur50相比無明顯差異，p=0.054。
　　術(shù)后第21d（即給藥第14d），SNI+PGB大鼠較正常對照組及SNI模型組體重明顯下降。術(shù)后第35d(即停藥后

8、14d) SNI+PGB大鼠較正常對照組及SNI模型組體重?zé)o明顯差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.2機(jī)制探討:
　　ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測SNI溶劑組大鼠坐骨神經(jīng)殘端(LSnn)、血清CCL2表達(dá)水平與正常對照組大鼠相比明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SNI+Cur組大鼠與SNI溶劑組大鼠比較，SNI+Cur組大鼠坐骨神經(jīng)殘端(L-Snn)、血清CCL2表達(dá)水平無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　SNI溶劑組大鼠DRG CCL2表達(dá)水

9、平與正常對照組大鼠相比明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SNI+Cur組大鼠與SNI溶劑組比較明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　SNI溶劑組大鼠脊髓背角CCL2及CCR2表達(dá)水平與正常對照組相比明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SNI+Cur組大鼠與SNI溶劑組比較無明顯降低，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　SNI溶劑組脊髓背角Iba1表達(dá)水平與正常對照組大鼠組之間、SNI+Cur組與SNI溶劑組之間均無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　

10、　1.SNI模型術(shù)側(cè)后肢于術(shù)后第3d PWT值明顯下降;術(shù)后第7d，PWT值穩(wěn)定在2g左右，疼痛持續(xù)時(shí)間長，穩(wěn)定性好。
　　2.SNI術(shù)后第3d、7d、12d、18d、28d脊髓背角趨化因子CCL2的表達(dá)水平較正常對照組大鼠均有升高趨勢，其中術(shù)后第3d，18d脊髓背角CCL2的表達(dá)水平顯著升高。
　　3.姜黃素可提高SNI大鼠機(jī)械痛閾值。鎮(zhèn)痛作用與濃度呈正相關(guān)，但有拐點(diǎn)，鎮(zhèn)痛作用最佳濃度為25mg/kg，bid(50mg/d