抗豬偽狂犬病病毒糖蛋白gE和雞IFIT5單克隆抗體的制備及鑒定.pdf

1、豬偽狂犬病病毒(PRV)是引起豬偽狂犬病(PR)的病原體，長期以來對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。PR的防治主要依靠疫苗免疫，弱毒疫苗Batha K-61在中國廣泛應用，并在上世紀90年代對PR疫情控制起到良好作用，但是2011年以來不同疫苗免疫的豬場均出現(xiàn)轉陽情況，PR再次流行。Batha K-61疫苗株缺失了整個gE基因，因此gE蛋白是鑒別野毒和疫苗毒感染的標志蛋白。
　　為區(qū)分Batha K-61疫苗株與野毒株，本研究制備針對

2、gE蛋白的單克隆抗體。利用原核表達系統(tǒng)，體外表達了PRV-DX毒株糖蛋白gE的主要抗原表位區(qū)域蛋白，以純化的重組His-gE蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合，結合ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）、IFA（間接免疫熒光試驗），應用有限稀釋克隆法篩選，獲得了三株針對PRV糖蛋白gE(1H12，2E7，2E9)的單克隆雜交瘤細胞株。Western blot與IFA檢測顯示，獲得的三株單抗與重組蛋白His-gE、

3、PRV感染細胞病毒蛋白gE以及轉染的gE蛋白均有良好反應。
　　應用所制備的單克隆抗體，能夠正確區(qū)分Batha K-61疫苗株與PRV-DX野毒株;以PRV-DX株分別感染不同細胞，連續(xù)傳代6代，并以gE單克隆抗體進行檢測。結果顯示除Veto細胞、PK-15細胞外，PRV-DX株還可以穩(wěn)定感染MDCK細胞、Marc145細胞、CEF細胞，卻不能穩(wěn)定感染DF-1細胞。
　　IFIT家族蛋白屬于ISGs，病毒、細菌以及干擾素刺激

4、時該家族蛋白大量表達，在宿主抗病毒以及先天免疫應答中發(fā)揮重要作用，禽類只有IFIT5蛋白。在禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)感染DF-1細胞的亞細胞蛋白質組研究中發(fā)現(xiàn)，雞源IFIT5(chIFIT5)蛋白在胞漿內上調表達，但作用機制尚不清楚，目前缺乏IFIT5蛋白檢測的特異性抗體。本研究體外克隆了chIFIT5基因，并利用原核表達系統(tǒng)，表達出His-IFIT5重組蛋白。以純化的His-IFIT5蛋白為免疫原免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠的

5、脾細胞與骨髓瘤細胞融合，結合ELISA和Western blot技術，應用有限稀釋克隆法篩選，結果獲得了四株針對chIFIT5蛋白(1A10、1A11、2A3和2H8)的單克隆雜交瘤細胞株。Western blot分析顯示，四株單抗與重組蛋白His-IFIT5、IBDV感染的DF-1細胞內IFIT5蛋白以及真核轉染Myc-IFIT5蛋白均有良好的反應，IFA檢測則不反應。chIFIT5蛋白的特異性單克隆抗體的獲得為進一步開展禽類IFIT