來氟米特對狼瘡鼠CD4+CD25+Treg細(xì)胞的影響.pdf

1、[目的]
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是多系統(tǒng)受累的一種自身免疫性疾病，免疫系統(tǒng)功能紊亂在其發(fā)病機(jī)制中起著重要作用，由于自身的免疫耐受機(jī)制被打破，T淋巴細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞功能異常導(dǎo)致多克隆B細(xì)胞活化，從而產(chǎn)生大量致病性自身抗體引起多臟器功能損害，目前一般認(rèn)為過度活化的T細(xì)胞可能是導(dǎo)致B細(xì)胞分化和激活的重要因素，是SLE的主要發(fā)病因素。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory

2、T cell，Treg)是一類具有免疫抑制功能的細(xì)胞，它以“主動”的方式在自體免疫系統(tǒng)中抑制其他T細(xì)胞的活化，維持自身免疫耐受，在防止自身免疫性疾病中具有至關(guān)重要的意義。目前關(guān)于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用引起許多學(xué)者的關(guān)注，發(fā)現(xiàn)在狼瘡病變發(fā)生發(fā)展過程調(diào)節(jié)性T細(xì)胞起了重要作用，已有許多研究證實(shí)SLE患者體內(nèi)CD4+CD25+Treg減少，推測這或許是SLE患者體內(nèi)自身免疫平衡被打破，導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展的原因之一。然而用于治療S

3、LE的常用免疫抑制藥物糖皮質(zhì)激素，來氟米特是否會通過改善具有免疫抑制作用的調(diào)節(jié)性Treg的數(shù)量/功能發(fā)揮治療作用尚不得而知，目前相關(guān)研究報(bào)道還較少。
　　 本研究旨在了解目前臨床上治療SLE常用藥物對于體內(nèi)Treg的影響，探討這些藥物的可能作用途徑及其對免疫耐受的影響。通過來氟米特(Leflunmide，LEF)干預(yù)MRL/Lpr系自發(fā)性系統(tǒng)性紅斑狼瘡模型小鼠，觀察其體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+regu

4、latory T cells，Treg)的數(shù)量及其特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3基因的表達(dá)變化，并檢測狼瘡小鼠體內(nèi)TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子含量變化，初步探討來氟米特在系統(tǒng)性紅斑狼瘡治療中的可能作用機(jī)制，為SLE的治療提供新的思路及新的作用靶點(diǎn)，從而更有效的干預(yù)疾病。
　　 [方法]
　　 取8周齡MRL/Lpr系狼瘡小鼠18只隨機(jī)分成對照組、來氟米特組、強(qiáng)的松組，每組6只，對照組以灌胃方式每天給予生理鹽水，來氟米特組按

5、20mg/(kg·d)以灌胃方式給予2.5mg/ml的LEF混懸液，強(qiáng)的松組2mg/(kg·d)以灌胃方式給予0.25mg/ml的強(qiáng)的松混懸液，8周后流式細(xì)胞儀檢測脾細(xì)胞中CD4、CD25、Foxp3表達(dá)量，然后通過熒光定量RT-PCR分析狼瘡鼠脾組織中轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA的表達(dá)水平，并逐層分析比較各組間的差異。同時(shí)采集狼瘡小鼠外周血血清，ELASA方法檢測小鼠體內(nèi)TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子含量，并對其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較各

6、組之間的差異。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)來氟米特組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中比例明顯高于空白對照組(P<0.01)，強(qiáng)的松組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中比例高于空白對照組(P<0.01)，來氟米特組與強(qiáng)的松組相比CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中比例來氟米特組較高(P<0.05)。
　　 (2)來氟米特組CD4+CD25highT細(xì)胞在CD4+細(xì)胞中所占

7、比例與對照組相比有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，強(qiáng)的松組的CD4+CD25highT細(xì)胞比例在CD4+細(xì)胞中所占比例與對照組相比也有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，來氟米特組與強(qiáng)的松組的CD4+CD25+highT細(xì)胞/CD4+細(xì)胞無明顯差別(P>0.05)。
　　 (3)來氟米特組CD4+CD25highFoxp3+T細(xì)胞比例在CD4+細(xì)胞中所占比例與對照組相比有所升高，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

8、)，強(qiáng)的松的CD4+CD25highFoxp3+T細(xì)胞比例在CD4+細(xì)胞中所占比例與對照組相比也有所升高，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (4)來氟米特組與強(qiáng)的松組的Foxp3基因相對表達(dá)量均較對照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同時(shí)來氟米特組的Foxp3表達(dá)量較強(qiáng)的松組高(P<0.05)。
　　 (5)來氟米特組、強(qiáng)的松組的IL-10、TGF-β細(xì)胞因子含量較空白對照組均有所升高(P<0.05)，同

9、時(shí)來氟米特組的細(xì)胞因子含量高于強(qiáng)的松組(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 (1)來氟米特及強(qiáng)的松均能提高狼瘡鼠體內(nèi)CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平，但對CD4+CD25highFoxp3+Treg細(xì)胞水平無明顯影響，其中以來氟米特對狼瘡鼠體內(nèi)CD4+CD25+Treg細(xì)胞調(diào)節(jié)作用較強(qiáng)。
　　 (2)來氟米特及強(qiáng)的松均能使特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3mRNA表達(dá)水平有所增高，來氟米特組作用較為顯著。