基于適體的癌細(xì)胞檢測(cè)及碳納米管復(fù)合材料生物相容性研究.pdf

1、準(zhǔn)確、靈敏地診斷白血病對(duì)于臨床醫(yī)生選擇合適的治療方法至關(guān)重要。目前白血病診斷的常規(guī)技術(shù)往往耗時(shí)、成本高、檢測(cè)儀器昂貴,所以,開(kāi)發(fā)一些檢測(cè)成本低,使用儀器簡(jiǎn)單,并能提供靈敏、準(zhǔn)確的診斷結(jié)果的方法是即時(shí)診斷領(lǐng)域的發(fā)展目標(biāo)。適體是一種被視為化學(xué)合成抗體的單鏈DNA/RNA構(gòu)成的分子探針,在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用潛力。本論文在基于適體的腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方面開(kāi)展了一些研究工作。另外,構(gòu)建納米復(fù)合材料用于發(fā)展骨組織工程意義重大。本論文的主要研究工作

2、如下:
　　 1.將對(duì)人急性白血病細(xì)胞(CCRF-CEM)具有特異性識(shí)別能力的巰基修飾適體(sgc8c)自組裝到金電極表面,開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單、方便、低成本、無(wú)標(biāo)記的早期檢測(cè)白血病細(xì)胞的電化學(xué)傳感器。用循環(huán)伏安和電化學(xué)阻抗表征了修飾電極,并通過(guò)計(jì)時(shí)庫(kù)侖分析得到了電極表面的適體密度。所制備的適體傳感器經(jīng)CCRF-CEM細(xì)胞孵育后,電極界面上的電子轉(zhuǎn)移電阻(Ret)顯著增大；且傳感器對(duì)CCRF—CEM細(xì)胞具有良好的選擇性。Ret值和細(xì)胞

3、濃度對(duì)數(shù)值呈線性關(guān)系,檢測(cè)線性范圍為1×104—1×107cells/mL,檢測(cè)限為6×103cells/mL。
　　 2.利用無(wú)標(biāo)記金納米顆粒(AuNPs)做指示劑,開(kāi)發(fā)了一種可視比色檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的方法。該分析主要是基于單鏈DNA能夠展開(kāi)并暴露出堿基部分,吸附到AuNPs表面,從而使得AuNPs在高鹽濃度下保持穩(wěn)定。當(dāng)將CCRF-CEM細(xì)胞懸浮液和單鏈寡核苷酸適體sgc8c孵育后,適體可選擇性地結(jié)合到目標(biāo)細(xì)胞表面,使得離心上清

4、液中DNA的濃度降低,導(dǎo)致AuNPs在高鹽濃度下失去穩(wěn)定并發(fā)生團(tuán)聚,而非目標(biāo)細(xì)胞RAJI和隨機(jī)序列DNA不會(huì)引起AuNPs溶液顏色的變化。該方法在肉眼比色分析和光譜分析方面都具有很好的靈敏度。
　　 3.通過(guò)溶劑揮發(fā)法,將碳納米管(CNTs)摻雜到殼聚糖-明膠(chitosan—gelatin,CG)復(fù)合材料中,顯著增強(qiáng)了CG復(fù)合材料的機(jī)械性能,將擴(kuò)大其在骨組織工程中的應(yīng)用前景。用掃描電鏡、接觸角測(cè)試和拉伸測(cè)試表征了CG/CNT