基于金納米粒子與PCR技術(shù)構(gòu)建電化學(xué)生物傳感器的研究.pdf

1、生物傳感器利用生物活性物質(zhì)（如酶、抗體、核酸、微生物及細(xì)胞等）作為識別元件來對各種待測物質(zhì)進(jìn)行分析檢測，具有優(yōu)良的特異性和靈敏度，在醫(yī)藥衛(wèi)生、生物工程、環(huán)保等i者多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。金納米顆粒是生物體系中應(yīng)用得最為廣泛的納米材料之一。近幾年，將金納米顆粒用于藥物傳輸、腫瘤治療、構(gòu)建生物傳感器等方面的報(bào)道層出不窮。另一方面，PCR技術(shù)是現(xiàn)代分子生物學(xué)最重要的技術(shù)之一，具有特異、靈敏、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好以及自動化等優(yōu)點(diǎn)。本論文綜

2、合運(yùn)用金納米粒子和PCR技術(shù)開展了構(gòu)建分子生物電化學(xué)傳感器的研究，取得了一些創(chuàng)新性的結(jié)果。
　　 1．腫瘤細(xì)胞電化學(xué)生物傳感器的研究端粒酶活性幾乎表現(xiàn)在所有惡性腫瘤中，越來越多的研究提示，端粒酶檢測可用于腫瘤的早期診斷。作者首先將端粒酶催化延伸的產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過將PCR水解后純化的產(chǎn)物固定在石墨電極表面，檢測到了鳥嘌呤的直接電化學(xué)信號，并進(jìn)而運(yùn)用示差脈沖伏安法，通過石墨電極上鳥嘌呤的電化學(xué)信號檢測到端粒中富含鳥嘌呤的重復(fù)

3、序列，從而構(gòu)建了基于端粒酶活性的用于檢測腫瘤細(xì)胞的生物傳感器。與此同時(shí)，作者將端粒酶的特異性底物序列修飾在金納米粒子表面，在端粒酶的催化下，此序列將延伸，并在鉀離子的存在下形成分子間的四聚體結(jié)構(gòu)，從而引起金納米粒子的聚集，紫外可見光譜表征金納米粒子聚集狀態(tài)驗(yàn)證了上述電化學(xué)生物傳感器的檢測結(jié)果。本研究的優(yōu)勢在于不需要使用放射性物質(zhì)標(biāo)記，操作過程簡單，能夠在細(xì)胞環(huán)境中進(jìn)行檢測，有利于模擬臨床腫瘤細(xì)胞檢測的環(huán)境，準(zhǔn)確而且靈敏度較高。
　

4、　 2．血小板衍生生長因子生物傳感器的研究運(yùn)用切口核酸內(nèi)切酶(NEase)的類PCR擴(kuò)增放大效應(yīng)以及基于金納米粒子大比表面積的信號放大作用，達(dá)到雙重放大檢測PDGF-BB（血小板衍生生長因子）的目的，該檢測方法不僅構(gòu)建了生物傳感器用于檢測PDGF-BB，而且能夠極大的提高 PDGF-BB檢測的靈敏度，降低PDGF-BB檢測的濃度，檢測限可以達(dá)到10nM級別。該研究為檢測低濃度的PDGF-BB提供了一個(gè)很好的方法，同時(shí)，借助該方法也可用