卡介苗防治哮喘作用研究及新型PDE4抑制劑Zl-n-91抗COPD作用的初步探討.pdf

1、cAMP和cGMP能夠介導(dǎo)多種生物反應(yīng)，如調(diào)節(jié)細(xì)胞分泌、收縮、代謝和生長(zhǎng)等重要的細(xì)胞功能，對(duì)PKA和：PKG、鳥苷酸交換因子、環(huán)核苷酸門控的鈉通道和鈣通道有調(diào)節(jié)作用。調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的cAMP和cGMP水平能夠?qū)?xì)胞生理產(chǎn)生重要影響。cAMP和cGMP在細(xì)胞內(nèi)的水平主要通過(guò)腺苷酸環(huán)化酶和鳥苷酸環(huán)化酶的合成和多種磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)的水解來(lái)保持。PDE是細(xì)胞內(nèi)存在的一種重要的酶類，分為11個(gè)家族，即PDE1-

2、11，可以水解cAMP和cGMP中的磷酸二酯鍵，使其變?yōu)闊o(wú)活性的5’—AMP和5’—GMP。抑制磷酸二酯酶可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能，對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，其中PDE4抑制劑在呼吸系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用尤其受到重視，開(kāi)發(fā)中的PDE4抑制劑主要包括roflumilast、cilomilast、piclomilast、tetomilst等，其中Roflumilast和Cilomilast最值得關(guān)注，已進(jìn)入臨床Ⅲ期研究

3、，有望用于哮喘和COPD的治療。 分支桿菌是最強(qiáng)的Th1反應(yīng)誘導(dǎo)劑之一，卡介苗是減毒活牛分支桿菌，最初用作結(jié)核疫苗，后來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)卡介苗能夠調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，可以用于預(yù)防或治療哮喘，但是卡介苗防治哮喘的機(jī)制尚未完全闡明，本論文第一部分以PDE為中心，觀察了卡介苗及其相關(guān)成分免疫對(duì)哮喘大鼠癥狀的改善作用，并對(duì)Th1/Th2平衡以及對(duì)肺組織中的PDE活性和表達(dá)的影響，同時(shí)對(duì)cAMP及其信號(hào)通路的變化進(jìn)行了檢測(cè)，從而進(jìn)一步闡明卡

4、介苗防治哮喘的可能機(jī)制。 目的：觀察卡介苗免疫對(duì)哮喘大鼠模型的治療作用，并研究其可能的作用機(jī)制。方法：用OVA致敏并攻擊復(fù)制大鼠哮喘模型，同時(shí)以卡介苗及其相關(guān)成分免疫大鼠，觀察哮喘大鼠肺內(nèi)的炎癥變化，氣道高反應(yīng)性改變、Th1/Th2平衡、PDE活性及各PDE家族的表達(dá)、cAMP水平以及cAMP下游效應(yīng)蛋白PKA和Epac1表達(dá)水平的變化；并用LPS刺激損傷A549細(xì)胞，模擬哮喘組織損傷的細(xì)胞模型，同時(shí)用卡介苗進(jìn)行干預(yù)，觀察卡介苗

5、對(duì)細(xì)胞PDE以及PKA、Epac1表達(dá)水平的影響，從而推測(cè)卡介苗免疫治療大鼠哮喘的可能機(jī)制。結(jié)果：卡介苗及其相關(guān)成分能夠不同程度的減輕哮喘大鼠肺內(nèi)的炎癥，降低大鼠氣道高反應(yīng)性，抑制PDE活性和多種PDE的表達(dá)水平，降低cAMP和PKA水平，不同濃度的卡介苗也能夠抑制A549細(xì)胞的PDE及PKA的表達(dá)。結(jié)論：卡介苗免疫能夠改善哮喘大鼠的癥狀，而PDE抑制可能是其機(jī)制之一，卡介苗或其相關(guān)成分可能具有潛在的多重PDE抑制作用。 PDE

6、4抑制劑在COPD治療中的應(yīng)用也受到了廣泛關(guān)注，有臨床數(shù)據(jù)顯示Roflumilast和Cilomilast這兩個(gè)進(jìn)入臨床Ⅲ期研究的PDE4抑制劑能夠改善COPD患者的呼吸功能和惡化率，并能夠有效改善生活質(zhì)量。目前治療COPD的方法十分有限，迫切需要開(kāi)展一些全新的療法，而PDE4抑制劑由于其能夠有效抗炎而成為一類較有前景的COPD治療藥物。本論文第二部分初步研究了一新型PDE4抑制劑Z1—n-91對(duì)大鼠COPD模型的治療作用，提示了其可能

7、存在的臨床應(yīng)用價(jià)值。目的：初步探討新型PDE4抑制劑Zl—n-91對(duì)于大鼠COPD模型的治療作用，為其將來(lái)的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法：熏煙及氣道滴入LPS復(fù)制大鼠COPD模型，并用0.03mg/kg、0.3mg/kg、3mg/kg的Zl—n-91進(jìn)行治療，觀察大鼠肺內(nèi)的炎癥變化，PDE4活性變化，肺組織MPO活性和MMP-9水平以及大鼠肺順應(yīng)性和肺阻力的改變。結(jié)果：各濃度的Zl—n-91能夠不同程度的減少COPD大鼠肺組織的炎癥浸潤(rùn)，有效