葡萄糖對血管內皮細胞一氧化氮釋放及內皮型一氧化氮合酶活性的影響.pdf

1、目的：探討在體外培養(yǎng)的條件下，葡萄糖對豬髖動脈內皮細胞(PIEC)釋放一氧化氮(nitric oxide NO)、超氧陰離子(superoxide anion O2-)及內皮型一氧化氮合酶(endothelial NO synthase eNOS)活性的影響。 方法：自中國科學院上海生命科學院細胞資源中心購買PIEC，置于含10％胎牛血清、青霉素l000/ml、鏈霉素100μg/ml的RPMI-1640培養(yǎng)液中，取貼壁生長良好的

2、第6代PIEC，用0.25％胰酶消化，細胞計數板計數，以每孔4×105個細胞接種到24孔板上，24h后觀察細胞貼壁生長良好。待細胞生長至70％-80％融合時，將胎牛血清濃度改為2％使細胞處于基本靜止狀態(tài)。隨機分組，分為對照組、普通組和高糖組，分別加入5.5mmol/L、11.1 mmol/L、22.2mmol/L葡萄糖，每組設五個復孔。置于37℃、5％CO2溫箱中培養(yǎng)，分別于24h、72h及1周時進行檢測。在每個檢測時間點前24h傳代一

3、次，使細胞數目相等，盡量減少細胞數目對結果的影響。 NO檢測采用硝酸還原酶法，通過測定培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的含量，間接測出NO水平，根據顯色深淺反映濃度的高低。為排除培養(yǎng)液本身可能含有的亞硝酸鹽干擾，設空白培養(yǎng)液對照。超氧化物可以還原水溶性四嘩鹽(WST-1)產生可溶性有色物質；NOS催化產生NO，NO與親核物質生成有色化合物，分別采用化學比色法在450nm和530nm波長測定吸光值來反映O2-含量及eNOS活性。 結果：2

4、4h時普通組和高糖組使得NOS活性、NO及O2-的含量均較對照組升高，其中普通組NO含量為77.80±9.05μmol/L、O2-含量為1.55±0.37，P<0.05，eNOS活性為0.95±0.27U/L，P<0.05：高糖組eNOS活性1.38±12 U/L、NO含量91.07±11.36μmol/L，P<0.05，O2-的含量2.64±0.1 1，P<0.01。72h時普通組和高糖組eNOS活性、NO及O2-的含量均較對照組升高

5、，其中普通組eNOS活性1.07±0.13U/L、NO含量89.84±8.03μmol/L，P<0.05，O2-的含量4.86±0.42，P<0.01；高糖組eNOS活性1.55±0.10 U/L、NO含量105.54±6.41μmol/L，O2-的含量5.65±0.76，P<0.01。1周時普通組和高糖組eNOS活性、NO及O2-的含量均較對照組降低，其中普通組eNOS活性0.47±06 U/L、NO含量41.59±8.21μmol/