金屬離子對(duì)TBt構(gòu)象及其免疫活性的影響.pdf

1、苦蕎屬于蕎麥栽培種中的一種,由于其特殊的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值逐漸引起人們長期的關(guān)注,苦蕎含有豐富的黃酮類化合物、酚類化合物、活性蛋白和其他物質(zhì),經(jīng)常食用可預(yù)防和治療心腦血管疾病,降低“三高”、延緩衰老等,被稱為21世紀(jì)人類自己能種植的“靈丹妙藥”,“長生不老的保健食品”等。但是過敏癥也不斷報(bào)道,食用蕎麥后可能會(huì)引起一系列的過敏反應(yīng),如蕁麻疹,哮喘,嚴(yán)重時(shí)甚至休克,死亡,這是由于苦蕎中的某些過敏成分經(jīng)食用后所引起的。本研究小組先前已經(jīng)分離純

2、化得到分子量為56kDa、34kDa和24kDa的過敏原,用免疫印跡法檢測(cè)到它們能夠同蕎麥過敏患者血清中的IgE特異性結(jié)合,因此研究低過敏性的苦蕎食品是非常必要的。通常,降低過敏蛋白的免疫活性的方法有加熱,調(diào)節(jié)pH,金屬離子,物理輻射等等。本實(shí)驗(yàn)主要從金屬離子與苦蕎過敏蛋白TBt的相互作用進(jìn)行研究。
　　按照前期的方法,本研究首先通過分離、純化得到純度95％以上的過敏蛋白TBt。之后配置不同金屬離子溶液(Cu2+、Mg2+、Ca2

3、+、Ba2+、Ni2+、AL3+),并與TBt以不同比例進(jìn)行混合,待相互作用一段時(shí)間后進(jìn)行熒光光譜分析。結(jié)果表明,在所選的金屬離子中,Cu2+對(duì)TBt的結(jié)構(gòu)和活性有較明顯的影響。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示,TBt與Cu2+的結(jié)合位點(diǎn)約為1:1,二者主要以靜電作用力結(jié)合。圓二色光譜探討了Cu2+對(duì)TBt二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響,發(fā)現(xiàn)Cu2+與TBt相互作用后其二級(jí)結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯變化。但Native-PAGE分析和ELISA檢測(cè)均顯示,Cu2+與TBt作用后

4、,可使典型Cupin家族的過敏原TBt由三聚體進(jìn)一步聚合形成部分六聚體,同時(shí)IgG結(jié)合能力有所降低。由此得出Cu2+的加入可以使得TBt形成六聚體,部分抗原決定簇被遮擋,導(dǎo)致過敏性有所降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)論為深入研究TBt在植物體內(nèi)的存在狀態(tài)以及蕎麥中特征微量元素Cu2+等對(duì)儲(chǔ)藏蛋白的調(diào)控提供了理論參考和科學(xué)依據(jù)。
　　為了檢測(cè)幾種食品中可能存在有微量的苦蕎過敏蛋白,本實(shí)驗(yàn)采用純化的TBt免疫動(dòng)物制備兔和鼠多克隆抗體,建立雙抗體夾心酶聯(lián)