低強(qiáng)度脈沖超聲促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后再生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探索低強(qiáng)度脈沖超聲(low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS)照射是否促進(jìn)雪旺細(xì)胞(Schwann cells，SCs)及大鼠坐骨神經(jīng)缺損自體神經(jīng)翻轉(zhuǎn)移植術(shù)后軸突的生長，尋求最佳超聲照射劑量，同時初步探索其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.采用250mW/cm2，500mW/cm2和750mW/cm2三個強(qiáng)度的LIPUS照射體外培養(yǎng)的SCs，每天一次，每次5分鐘，在照射的第1

2、、2、3、5、7天，分別用S100免疫熒光染色法及CCK8法檢測LIPUS照射后SCs的生長及增殖情況;RT-PCR技術(shù)檢測S100、GFAP、CNTF、BDNF的表達(dá)水平。
　　2.建立SD大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損自體神經(jīng)翻轉(zhuǎn)移植模型，術(shù)后分別應(yīng)用上述三個強(qiáng)度LIPUS經(jīng)皮照射移植處的坐骨神經(jīng)，隔天一次，每次5分鐘，持續(xù)照射2～12周，通過坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)評價、超聲造影肌肉灌注評價、電生理評價、NF200免疫熒光法染色、再生有髓

3、鞘神經(jīng)半薄切片后甲苯胺藍(lán)染色、再生有髓鞘神經(jīng)超薄切片后透射電鏡觀察、大鼠腓腸肌肌肉濕重恢復(fù)率、大鼠腓腸肌橫截面Masson染色及肌纖維橫截面積比較、Western blot法檢測腓腸肌NF-κB p65表達(dá)等方法評價超聲對移植神經(jīng)生長的作用。
　　3.超聲引導(dǎo)下將溫度探針放入SD大鼠坐骨神經(jīng)周圍，監(jiān)測250mW/cm2，500mW/cm2和750mW/cm2三個不同強(qiáng)度LIPUS經(jīng)皮照射坐骨神經(jīng)5分鐘的過程中溫度變化情況。

4、　　結(jié)果：
　　1.普通光鏡和S100免疫熒光染色結(jié)果均顯示:接受照射第2天，實(shí)驗(yàn)組的SCs數(shù)量均多于對照組，低劑量組最多。CCK8檢測結(jié)果如下:照射第1天，各組SCs增殖無明顯差異(P＞0.05);照射第3、5、7天，低劑量組和中劑量組細(xì)胞增殖均明顯高于高劑量組和對照組(P＜0.01)。
　　2.照射第3天和第7天，實(shí)驗(yàn)組S100、CNTF、BDNF的表達(dá)均顯著高于對照組(P＜0.05)，以低劑量組最高，實(shí)驗(yàn)組GFAP的表

5、達(dá)顯著低于對照組(P＜0.05)，以低劑量組最低。
　　3.第2周起低劑量組坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)明顯優(yōu)于其他組(P＜0.05)。第4周起低劑量組的PI和AUC明顯高于其他組(P＜0.05)。第12周時低劑量組和中劑量組的動作電位波幅峰值和電生理曲線下面積的恢復(fù)指數(shù)均顯著高于其他兩組，以低劑量組最高(P＜0.05)。第12周時低劑量組再生有髓神經(jīng)纖維的密度、厚度及軸突直徑均最大(P＜0.05)。第8周時低劑量組軸突生長最快。低劑量組的腓

6、腸肌肌肉濕重恢復(fù)率和肌纖維橫截面積均大于其他組(P＜0.05)。從第4周起低劑量紐腓腸肌NF-κB p65表達(dá)均低于其他各組。各組PI和AUC與動作電位波幅峰值和電生理曲線下面積的恢復(fù)指數(shù)呈高度線性正相關(guān)(r均＞0.70)，與腓腸肌NF-κB p65表達(dá)呈高度線性負(fù)相關(guān)(r絕對值均＞0.70)。
　　4.三個劑量實(shí)驗(yàn)組在照射起點(diǎn)時、終點(diǎn)時的即刻溫度及治療過程中最高溫度均無明顯改變(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　三個