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文檔簡介
1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)是由鐮刀菌屬病原真菌產(chǎn)生的真菌毒素之一,在自然界廣泛存在,可引起人畜中毒。本實(shí)驗(yàn)采用不同濃度的DON作用于PIEC、HUVEC和Lovo三種細(xì)胞24h,倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)變化,MTT法測定細(xì)胞增殖的變化,TUNEL 法檢測DON誘導(dǎo)這三種細(xì)胞凋亡的凋亡率,用免疫組織化學(xué)染色方法測定DON誘導(dǎo)這三種細(xì)胞凋亡過程中Caspase-9和Bax表達(dá)的變化,結(jié)果顯示,高濃度DON可明顯改變細(xì)胞的形態(tài),不同濃度的DO
2、N均可抑制細(xì)胞的增殖,相同濃度下對PIEC的抑制作用最顯著(統(tǒng)計(jì)學(xué)比較P<0.05)。用 TUNEL檢測凋亡率,結(jié)果顯示不同濃度的DON對這三種細(xì)胞均有誘導(dǎo)凋亡的作用,對于PIEC和LOVO而言,在DON濃度為500ng/ml時(shí),凋亡率達(dá)到最高(71.74%),HUVEC則在DON濃度為5μg/ml時(shí),凋亡率達(dá)到最高(26.61%),此后隨濃度的升高,凋亡率下降,可能與凋亡細(xì)胞崩解脫離細(xì)胞片有關(guān)。同時(shí),根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,初步推斷,DON誘導(dǎo)
3、PIEC凋亡可能與Caspases途徑有關(guān),凋亡促進(jìn)基因Bax在其中起到了一定的凋亡促進(jìn)作用,而在誘導(dǎo)HUVEC和Lovo細(xì)胞凋亡的過程中未檢測到Caspase-9和Bax的變化,故認(rèn)為DON誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞凋亡與Caspases途徑無關(guān),與促凋亡因子Bax無關(guān)。本試驗(yàn)還對兩種中藥單體成分——黃芩苷和脫水穿心蓮內(nèi)酯,及阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo三種胃腸道癌細(xì)胞凋亡及在凋亡過程中Caspase-9和Bax的表達(dá)的變化進(jìn)
4、行了初步研究,結(jié)果顯示,三種藥物均可誘導(dǎo)這三種細(xì)胞的凋亡,其中,黃芩苷誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞的凋亡率最高,BGC-823次之;脫水穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)HCT-8細(xì)胞的凋亡率最高,BGC-823次之;阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823和HCT-8的凋亡率高于其誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞的凋亡率,試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn),黃芩苷和阿司匹林誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞凋亡,凋亡率在96h時(shí)達(dá)到最高,而到一周時(shí)凋亡率下降。本試驗(yàn)通過免疫組化方法檢測三種藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中Caspase-9和Ba
5、x的變化。結(jié)果顯示,誘導(dǎo)凋亡過程中Caspase-9的表達(dá)均有升高,推測這三種藥物誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo三種細(xì)胞凋亡與Caspases途徑有關(guān)。而凋亡抑制基因Bax在脫水穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞凋亡中表達(dá)未檢測到變化,推測該細(xì)胞凋亡過程與Bax無關(guān)。除此以外,Bax在黃芩苷、脫水穿心蓮內(nèi)酯和阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo細(xì)胞中的表達(dá)均有升高,Bax在凋亡過程中可能起到凋亡促進(jìn)作用。另外,本試驗(yàn)還用P
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