長春新堿和奎寧共載脂質體的制備及逆轉腫瘤耐藥性作用研究.pdf

1、長春新堿是一種一線抗癌藥物，常以硫酸鹽形式存在，臨床應用廣泛，但是長春新堿對神經系統尤其是外周神經的毒性以及易產生耐藥性限制了其在臨床上的應用。奎寧是傳統的抗瘧藥物，但是已有研究發(fā)現其具有耐藥逆轉作用。因此，為了提高長春新堿對耐藥腫瘤的治療作用并減少毒副作用，本論文在探討奎寧逆轉多藥耐藥機理的基礎上，制備了長春新堿與奎寧共載的脂質體。具體研究工作分成以下幾個部分:
　　本文首先探討了奎寧在A549/T、HCT-8/V和MCF-7/

2、A三種耐藥細胞中的逆轉耐藥機制，主要考察了奎寧對細胞中ATP含量及ATP酶活性的影響和奎寧對耐藥細胞中耐藥蛋白P-gp表達的影響。實驗結果表明奎寧可以降低三種耐藥細胞中ATP的含量并能降低細胞中ATP酶活性，證明奎寧是P-gp蛋白的底物。另外奎寧并能降低三種耐藥細胞中P-gp蛋白的表達量，顯示出顯著的耐藥逆轉作用?；陂L春新堿和奎寧的溶解度，以大豆磷脂和膽固醇為原料，用薄膜水化法制備了長春新堿和奎寧的共載脂質體，采用了SephadexG

3、-50凝膠柱層析法分離脂質體與游離藥物以測定脂質體的包封率，過程中以pH為7.4的PBS緩沖液為流動相進行洗脫，之后采用溶劑甲醇對脂質體結構進行破壞，使藥物逸出后，分別用HPLC法和UV法測定分離前后脂質體中的長春新堿和奎寧的含量，計算兩種藥物的載藥量和包封率。同時考察了兩種藥物和磷脂的比例變化對包封率和載藥量的影響，發(fā)現長春新堿和奎寧的比例為1∶2時，包封率和載藥量都相對較高，因此篩選為最佳的處方，用于后續(xù)實驗。繼而考察了脂質體的一系

4、列理化性質，包括外觀、粒徑、電位和形態(tài)，結果顯示制備好的脂質體的粒徑為62.47nm，PDI為0.283，另外考察脂質體的體外藥物釋放行為，發(fā)現隨著pH的降低，長春新堿和奎寧在PBS種的釋放速率都有所增加，且不管是藥物共載脂質體還是單載脂質體混合，兩種藥物之間的釋放基本不會相互干擾。隨后考察了共載脂質體的體內外抗腫瘤效果。首先通過MTT實驗測定了各個處方組對A549/T、HCT-8/V和MCF-7/A三種耐藥細胞的細胞毒性，結果表明共載

5、脂質體在三種耐藥細胞上都有很強的逆轉耐藥效果，IC50達到0.095±0.008μg/mL、1.36±0.25μg/mL和2.95±1.17μg/mL。同時考察了A549/T細胞、HCT-8/V細胞和MCF-7/A細胞在1h、2h、4h和8h四個時間點對長春新堿的攝取，通過HPLC方法測定細胞中長春新堿的含量，發(fā)現共載脂質體組可以提高細胞對長春新堿的攝取。其次通過摸索，本論文構建了A549/T細胞球模型和MCF-7/A細胞球模型，進一步

6、考察了各處方組對細胞球的毒性，發(fā)現長春新堿和奎寧共載脂質體相比其他組而言，同樣具有更強的細胞毒性。最后通過A549/T細胞裸鼠荷瘤模型，考察各組別藥物對荷瘤裸鼠的腫瘤抑制作用。結果顯示，長春新堿和奎寧共載脂質體對腫瘤的抑制效果顯著優(yōu)于游離藥物組和脂質體共混組，抑瘤率達到84.0％，體現了共載脂質體在提高體內抑瘤作用上的優(yōu)勢。綜上，長春新堿和奎寧的共載脂質體能夠有效裝載藥物，并對A549/T、HCT-8/V和MCF-7/A腫瘤的耐藥性顯示