牛蒡寡糖的修飾及其生物活性研究.pdf

1、近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，糖類(lèi)化合物具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒等多種生物活性，有望成為人類(lèi)戰(zhàn)勝疾病的重要藥物。加強(qiáng)糖類(lèi)藥物的資源開(kāi)發(fā)，尋找高效低毒的糖類(lèi)藥物或通過(guò)改造已知糖類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)以其提高生物活性，已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)課題。牛蒡寡糖是從藥用植物牛蒡根中分離得到的一種聚合度為13的果寡糖。已有研究發(fā)現(xiàn)牛蒡寡糖具有顯著促進(jìn)雙歧桿菌的生長(zhǎng)、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生物活性，還可作為食品和飼料的添加劑或天然藥物。
　　 本研

2、究以新鮮的牛蒡根為原料，分離得到牛蒡寡糖粗品，得率20.58％；經(jīng)純化得到牛蒡寡糖純品，得率為85.12％，寡糖含量為98％。采用高效凝膠滲透色譜、紅外吸收光譜、核磁共振等檢測(cè)手段對(duì)牛蒡寡糖純品進(jìn)行了鑒定，確定所得寡糖為文獻(xiàn)報(bào)道的牛蒡寡糖。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用乙?；土蛩峄瘍煞N化學(xué)修飾方法對(duì)牛蒡寡糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，通過(guò)紅外吸收光譜、核磁共振等檢測(cè)手段鑒定牛蒡寡糖結(jié)構(gòu)中存在乙?；土蛩峄?。乙?；揎椧源姿狒麨橐阴；噭?，選擇冰醋酸為

3、反應(yīng)溶劑，濃度為50％的NaOH溶液為催化劑，通過(guò)改變物料比及其它反應(yīng)條件成功制備得到牛蒡寡糖醋酸酯衍生物，取代度分別為0.53、0.72、0.94、1.47，產(chǎn)率分別為47.2％、54.7％、58.4％、65.8％。硫酸化修飾采用了三氧化硫-吡啶法和氯磺酸-吡啶法兩種方法，同時(shí)探討了不同反應(yīng)溶劑、投料比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間對(duì)牛蒡寡糖硫酸酯取代度的影響，通過(guò)對(duì)比分析確定了最佳反應(yīng)條件，即以三氧化硫-吡啶復(fù)合物為硫酸化試劑，以二甲基甲酰胺

4、為反應(yīng)試劑，以40℃為基本反應(yīng)溫度，以2 h為最佳反應(yīng)時(shí)間。在最佳反應(yīng)條件的基礎(chǔ)上，成功制備得到取代度分別為0.42、0.73、1.25、1.45的牛蒡寡糖硫酸酯衍生物。
　　 生物活性方面，對(duì)不同取代度和取代基的牛蒡寡糖衍生物進(jìn)行了促雙歧桿菌生長(zhǎng)及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫活性的研究。在促雙歧桿菌生長(zhǎng)的活性測(cè)定中，取代度DS＜1的牛蒡寡糖醋酸酯和牛蒡寡糖硫酸酯衍生物作為碳源添加物時(shí)，雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果明顯，且濃度為1.0 mg/mL左

5、右時(shí)菌數(shù)達(dá)到最大值；當(dāng)DS﹥1時(shí)，雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果不明顯，甚至下降。在促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖的活性測(cè)定中，所有取代度的牛蒡寡糖衍生物都能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力，取代度為0.72、0.94的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯活性提高顯著，且都在濃度250 μg/mL達(dá)到最大值；取代度為0.72的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯能夠顯著的促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖，前者在濃度250