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文檔簡介
1、近年來研究發(fā)現(xiàn),糖類化合物具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒等多種生物活性,有望成為人類戰(zhàn)勝疾病的重要藥物。加強(qiáng)糖類藥物的資源開發(fā),尋找高效低毒的糖類藥物或通過改造已知糖類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)以其提高生物活性,已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)課題。牛蒡寡糖是從藥用植物牛蒡根中分離得到的一種聚合度為13的果寡糖。已有研究發(fā)現(xiàn)牛蒡寡糖具有顯著促進(jìn)雙歧桿菌的生長、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生物活性,還可作為食品和飼料的添加劑或天然藥物。
本研
2、究以新鮮的牛蒡根為原料,分離得到牛蒡寡糖粗品,得率20.58%;經(jīng)純化得到牛蒡寡糖純品,得率為85.12%,寡糖含量為98%。采用高效凝膠滲透色譜、紅外吸收光譜、核磁共振等檢測手段對牛蒡寡糖純品進(jìn)行了鑒定,確定所得寡糖為文獻(xiàn)報(bào)道的牛蒡寡糖。
本實(shí)驗(yàn)采用乙?;土蛩峄瘍煞N化學(xué)修飾方法對牛蒡寡糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾,通過紅外吸收光譜、核磁共振等檢測手段鑒定牛蒡寡糖結(jié)構(gòu)中存在乙?;土蛩峄?。乙?;揎椧源姿狒麨橐阴;噭?,選擇冰醋酸為
3、反應(yīng)溶劑,濃度為50%的NaOH溶液為催化劑,通過改變物料比及其它反應(yīng)條件成功制備得到牛蒡寡糖醋酸酯衍生物,取代度分別為0.53、0.72、0.94、1.47,產(chǎn)率分別為47.2%、54.7%、58.4%、65.8%。硫酸化修飾采用了三氧化硫-吡啶法和氯磺酸-吡啶法兩種方法,同時(shí)探討了不同反應(yīng)溶劑、投料比、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間對牛蒡寡糖硫酸酯取代度的影響,通過對比分析確定了最佳反應(yīng)條件,即以三氧化硫-吡啶復(fù)合物為硫酸化試劑,以二甲基甲酰胺
4、為反應(yīng)試劑,以40℃為基本反應(yīng)溫度,以2 h為最佳反應(yīng)時(shí)間。在最佳反應(yīng)條件的基礎(chǔ)上,成功制備得到取代度分別為0.42、0.73、1.25、1.45的牛蒡寡糖硫酸酯衍生物。
生物活性方面,對不同取代度和取代基的牛蒡寡糖衍生物進(jìn)行了促雙歧桿菌生長及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫活性的研究。在促雙歧桿菌生長的活性測定中,取代度DS<1的牛蒡寡糖醋酸酯和牛蒡寡糖硫酸酯衍生物作為碳源添加物時(shí),雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果明顯,且濃度為1.0 mg/mL左
5、右時(shí)菌數(shù)達(dá)到最大值;當(dāng)DS﹥1時(shí),雙歧桿菌體外培養(yǎng)增殖效果不明顯,甚至下降。在促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖的活性測定中,所有取代度的牛蒡寡糖衍生物都能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力,取代度為0.72、0.94的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯活性提高顯著,且都在濃度250 μg/mL達(dá)到最大值;取代度為0.72的牛蒡寡糖醋酸酯和取代度為0.42、0.73的牛蒡寡糖硫酸酯能夠顯著的促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞的增殖,前者在濃度250
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