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文檔簡介
1、【目的】探討髓系及非髓系細(xì)胞來源的Toll樣受體4(toll-likereceptor4,TLR4)在糖尿病視網(wǎng)膜的表達(dá)及對糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabeticretinopathy,DR)的影響。
【方法】取12周齡的雄性TLR4基因突變小鼠C3H/HeJ(Mut)及相應(yīng)野生型小鼠C3H/HeN(WT),制備骨髓移植嵌合體模型,用兩種純合體小鼠作自身移植對照(按骨髓供體至受體分組記為WT/Mut,Mut/WT,WT/WT,Mu
2、t/Mut),一月后用鏈脲佐菌素(STZ,200mg/Kg)建立糖尿病動(dòng)物模型,另取未做處理小鼠做空白對照(記為N組),于糖尿病模型建成一個(gè)月、兩個(gè)月、四個(gè)月后取材,電鏡觀察小鼠視網(wǎng)膜組織超微結(jié)構(gòu)的變化,免疫組化染色觀察細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)在視網(wǎng)膜組織的表達(dá),RT-PCR檢測視網(wǎng)膜TLR4及巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)mRNA的表達(dá),ELISA檢測血清中MIP-2、腫瘤壞死因子a(TNF-a)的濃度并測血清丙二醛(MDA
3、)的濃度。
【結(jié)果】超微電鏡顯示,糖尿病一月時(shí)小鼠視網(wǎng)膜組織即有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維水腫,核周間隙增寬,核固縮,胞漿顏色變淡,兩月時(shí)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿線粒體水腫,嵴變短,管腔狹窄,周細(xì)胞水腫,各模型組間損傷程度相比,以WT/WT組最重,Mut/Mut組最輕,WT/Mut組重于Mut/WT組;免疫組化定位ICAM-1顯示,ICAM-1染色在空白組視網(wǎng)膜內(nèi)顆粒層及節(jié)細(xì)胞層呈微黃色,糖尿病一月時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈棕黃色陽性表達(dá),兩
4、月時(shí)染色呈褐色強(qiáng)陽性表達(dá),并且新生毛細(xì)血管管壁呈陽性表達(dá),各模型組間表達(dá)強(qiáng)度相比,以WT/WT組強(qiáng)于Mut/Mut組,WT/Mut組強(qiáng)于Mut/WT組;視網(wǎng)膜組織RT-PCR結(jié)果顯示,各模型組TLR4及MIP-2的mRNA的表達(dá)在糖尿病一月、兩月、四月時(shí)依次上調(diào),各模型組間相比,mRNA的表達(dá)由高至低依次為WT/WT、WT/Mut、Mut/WT、Mut/Mut組(P<0.05);血清ELISA結(jié)果顯示,各模型組TNF-a、MIP-2及M
5、DA濃度在糖尿病一月、兩月、四月時(shí)依次上升,均高于空白對照組,各模型組間相比,濃度由高至低依次為WT/WT、WT/Mut、Mut/WT、Mut/Mut組(P<0.05)。
【結(jié)論】糖尿病視網(wǎng)膜病變隨病程發(fā)展而加重,神經(jīng)病變早于微血管病變;TLR4基因突變減輕糖尿病小鼠視網(wǎng)膜病變;髓系及非髓系來源的TLR4基因表達(dá)產(chǎn)物均對DR的病程發(fā)展有影響;并且髓系來源的TLR4基因表達(dá)產(chǎn)物相對于內(nèi)皮系來源的表達(dá)產(chǎn)物對DR的影響更為顯著,主要
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