過敏性紫癜兒童血管內(nèi)皮生長因子—634G-C基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的： 本實(shí)驗(yàn)通過聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(polymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphism PCR-RFLP)分析方法，檢測中國華南地區(qū)漢族過敏性紫癜(Henoch-Schonlein Purpura HSP)兒童血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor VEGF)-634G/C基因多

2、態(tài)性，其中包括紫癜性腎炎(Henoch-Schonlein Purpura．nephritis HSPN)患者及非HSPN患者，從而探討VEGF-634G/C與兒童HSP尤其是HSPN易感性的關(guān)系，從基因水平預(yù)測HSP的遺傳易感因素，為揭示HSP的病理生理學(xué)和遺傳學(xué)機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)對象：包括HSP患兒病例組(100例)和健康對照組(50例)，其中病例組包括HSPN組(50例)和非HSPN組(50例)。

3、 2、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的留?。焊鹘M實(shí)驗(yàn)對象入選時(shí)采2％乙二胺乙酸(EDTA)抗凝血2-3ml，分離出血漿和血細(xì)胞后分別貯存于-80℃保存?zhèn)溆谩?3、血細(xì)胞基因組DNA的提取：按照全血基因組DNA提取試劑盒提取各組外周血基因組DNA，紫外分光光度法測定DNA的濃度和純度。 4、VEGF-634G/C基因多態(tài)性分析：應(yīng)用PCR/RFLP法檢測，以外周血基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR上下游引物序列參照參考文獻(xiàn)及基因庫

4、資料設(shè)計(jì)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳分離，紫外燈下判斷結(jié)果。 5、血漿VEGF水平檢測：各組實(shí)驗(yàn)對象血漿用EIJSA雙抗夾心法檢測VEGF水平。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 所有數(shù)據(jù)用SPSS11.5處理。計(jì)算出各組實(shí)驗(yàn)對象VEGF基因型頻率和等位基因頻率，然后經(jīng)Hardy-Weinburg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，檢驗(yàn)各基因型頻率是否已達(dá)遺傳平衡，具有群體代表性。各組問構(gòu)成比差異采用x<'2>

5、檢驗(yàn)。計(jì)量資料用x±s表示，各組間數(shù)據(jù)的比較依據(jù)資料的性質(zhì)，用多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較方差分析。 結(jié)果： 1、各組實(shí)驗(yàn)對象的年齡、性別構(gòu)成比無顯著差別，具有可比性。 2、所選實(shí)驗(yàn)對象VEGF基因型頻率和等位基因頻率經(jīng)Hardy-Weinburg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，檢驗(yàn)各基因型頻率已達(dá)遺傳平衡，具有群體代表性。 3、HSPN組CC基因型頻率32.0％，顯著高于健康對照組CC基因型頻率10.0％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P<0.05)；HSPN組C等位基因頻率56.0％，顯著高于健康對照組C等位基因頻率35.0％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而CC基因型和C等位基因在無HSPN的HSP組和健康對照組間的分布無顯著差異性。 4、與GG基因型相比，CC基因型的HSP患兒HSPN的發(fā)生率明顯上升(P<0.05)。 5、HSPN組VEGF (189.55±56.23ng/L)較健康對照組VEGF(110.40±30.11ng/L)明顯