AMPK對(duì)大鼠心肌肥厚的影響.pdf

1、研究背景: 心肌肥厚(Cardiac hypertrophy，CH)是常見(jiàn)的心血管疾病臨床癥狀，主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大和間質(zhì)成分的改變(或稱為心臟重構(gòu))，心臟的順應(yīng)性和循環(huán)泵功能降低。 本實(shí)驗(yàn)就AMPK激動(dòng)劑-AICAR(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside)對(duì)由腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)(Transaortic constriction，TAC)造成大鼠CH的影響進(jìn)行了研究，同

2、時(shí)應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的攜帶AMPK的腺病毒載體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞，探討了AMPK負(fù)性調(diào)節(jié)由血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)刺激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的可能機(jī)制及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 研究方法: 1.通過(guò)TAC建立大鼠CH模型，分為：假手術(shù)對(duì)照組(Sham)、假手術(shù)治療組(Sham+AICAR)、CH對(duì)照組(TAC)、CH治療組(TAC+AICAR)。術(shù)后24 h起經(jīng)皮下注射AICAR(0.5 mg·kg-1·d-1)直至術(shù)后7周。CH

3、對(duì)照組和假手術(shù)對(duì)照組在同樣的時(shí)間皮下注射等量生理鹽水直至術(shù)后7周。 2.術(shù)后7周，測(cè)量大鼠血壓，多普勒超聲儀測(cè)定(1)左室后壁舒張末期厚度(PWT)；(2)左室舒張、收縮末期內(nèi)徑(LVDD，LVSD)；(3)左室短軸縮短率(FS％)等指標(biāo)判斷CH程度及心功能狀況；心肌組織HE染色，光鏡觀察及電鏡觀察病理學(xué)變化；按Nixion改良法，測(cè)定血清及心肌脂肪酸含量；RT-PCR檢測(cè)肥大相關(guān)基因、PPARα mRNA的表達(dá)；Western

4、 blot檢測(cè)PPARα蛋白的表達(dá)。 3.通過(guò)定向克隆和基因重組技術(shù)構(gòu)建攜帶野生型AMPK基因的腺病毒載體，將此載體感染原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞，MTT檢測(cè)細(xì)胞活力，RT-PCR及Western blot鑒定基因?qū)胧侄蔚挠行浴?4.用Ang Ⅱ作為促心肌肥大刺激劑，以ANF、β-MHCmRNA表達(dá)水平、3H-亮氨酸摻入率及心肌細(xì)胞直徑作為肥大指標(biāo)，觀察AMPK過(guò)度表達(dá)對(duì)心肌細(xì)胞肥大的影響；同時(shí)，通過(guò)Western blot

5、檢測(cè)MAPKs和磷酸化MAPKs蛋白表達(dá)，通過(guò)EMSA檢測(cè)NF-κB DNA結(jié)合活性，明確Ang Ⅱ刺激后，AMPK過(guò)度表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)MAPKs及NF-κB信號(hào)通路的影響，初步探討AMPK負(fù)性調(diào)節(jié)Ang Ⅱ誘導(dǎo)心肌肥大的可能機(jī)制。 結(jié)論: 1.活化的AMPK可抑制壓力負(fù)荷增加引起的大鼠CH。 2.AMPK對(duì)壓力負(fù)荷增加引起的大鼠CH的負(fù)性調(diào)節(jié)作用與其激活PPARα，并進(jìn)而增強(qiáng)心肌脂肪酸利用有關(guān)。 3.AMP