AMPK對大鼠心肌肥厚的影響.pdf

1、研究背景: 心肌肥厚(Cardiac hypertrophy，CH)是常見的心血管疾病臨床癥狀，主要表現(xiàn)為心肌細胞肥大和間質(zhì)成分的改變(或稱為心臟重構(gòu))，心臟的順應性和循環(huán)泵功能降低。 本實驗就AMPK激動劑-AICAR(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside)對由腹主動脈縮窄術(shù)(Transaortic constriction，TAC)造成大鼠CH的影響進行了研究，同

2、時應用本實驗室構(gòu)建的攜帶AMPK的腺病毒載體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞，探討了AMPK負性調(diào)節(jié)由血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)刺激誘導心肌細胞肥大的可能機制及信號轉(zhuǎn)導通路。 研究方法: 1.通過TAC建立大鼠CH模型，分為：假手術(shù)對照組(Sham)、假手術(shù)治療組(Sham+AICAR)、CH對照組(TAC)、CH治療組(TAC+AICAR)。術(shù)后24 h起經(jīng)皮下注射AICAR(0.5 mg·kg-1·d-1)直至術(shù)后7周。CH

3、對照組和假手術(shù)對照組在同樣的時間皮下注射等量生理鹽水直至術(shù)后7周。 2.術(shù)后7周，測量大鼠血壓，多普勒超聲儀測定(1)左室后壁舒張末期厚度(PWT)；(2)左室舒張、收縮末期內(nèi)徑(LVDD，LVSD)；(3)左室短軸縮短率(FS％)等指標判斷CH程度及心功能狀況；心肌組織HE染色，光鏡觀察及電鏡觀察病理學變化；按Nixion改良法，測定血清及心肌脂肪酸含量；RT-PCR檢測肥大相關(guān)基因、PPARα mRNA的表達；Western

4、 blot檢測PPARα蛋白的表達。 3.通過定向克隆和基因重組技術(shù)構(gòu)建攜帶野生型AMPK基因的腺病毒載體，將此載體感染原代培養(yǎng)的心肌細胞，MTT檢測細胞活力，RT-PCR及Western blot鑒定基因?qū)胧侄蔚挠行浴?4.用Ang Ⅱ作為促心肌肥大刺激劑，以ANF、β-MHCmRNA表達水平、3H-亮氨酸摻入率及心肌細胞直徑作為肥大指標，觀察AMPK過度表達對心肌細胞肥大的影響；同時，通過Western blot

5、檢測MAPKs和磷酸化MAPKs蛋白表達，通過EMSA檢測NF-κB DNA結(jié)合活性，明確Ang Ⅱ刺激后，AMPK過度表達對細胞內(nèi)MAPKs及NF-κB信號通路的影響，初步探討AMPK負性調(diào)節(jié)Ang Ⅱ誘導心肌肥大的可能機制。 結(jié)論: 1.活化的AMPK可抑制壓力負荷增加引起的大鼠CH。 2.AMPK對壓力負荷增加引起的大鼠CH的負性調(diào)節(jié)作用與其激活PPARα，并進而增強心肌脂肪酸利用有關(guān)。 3.AMP