BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用IN-1抗體修復(fù)大鼠急性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)移植聯(lián)合髓鞘生長阻逆蛋白抗體IN-1(monoclonal antibody IN-1)對大鼠皮質(zhì)脊髓束橫斷后脊髓損傷修復(fù)的影響及意義。
　　 方法：采用密度梯度離心與貼壁篩選法相結(jié)合制備大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，選用清潔級(jí)健康Sprague-Dawley(SD)大鼠180只，體重250-300g，雌雄不限，

2、隨機(jī)分成手術(shù)對照組(n＝60)、BMSCs移植組(n＝60)、BMSCs移植聯(lián)合IN-1組(n＝60)，每組又按照手術(shù)后時(shí)間隨機(jī)平均分為1d、4d、7d、14d、21d和28d六個(gè)小組，每個(gè)小組10只。所有大鼠首先行蛛網(wǎng)膜下腔置管，然后在相當(dāng)于T8椎板水平用做好標(biāo)記的顯微剪刀剪斷脊髓的背側(cè)2/3，建立大鼠皮質(zhì)脊髓束橫斷損傷模型。其中手術(shù)對照組通過置管每次注入生理鹽水5μ1，而BMSCs組每次注入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液(5μ1)，IN-1和

3、BMSCs聯(lián)合作用組，每次注入IN-12.5μ1和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液2.5μl，每天分為早、中、晚三次注射，最長持續(xù)1w。每組中取5只，在手術(shù)前及手術(shù)后1d、1w、2w、3w及4w，采用BBB(Basso,Beattle,Bresnahan)評(píng)分評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能，然后取出脊髓組織檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillry acidic protein,GFAP)表達(dá)的變化。其余對照組及BMSCs移植組、BMSCs移植聯(lián)合IN-1

4、組動(dòng)物于損傷后1d、4d、7d、14d、21d和28d六個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出傷段脊髓，分別行RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)檢測GAP-43基因表達(dá)的變化，所得數(shù)據(jù)采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：1、脊髓損傷后GAP-43mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其表達(dá)的高峰分別在脊髓損傷后7d、14d、21d時(shí)間點(diǎn)；

5、2、移植BMSCs后三者mRNA的表達(dá)上調(diào)，聯(lián)合應(yīng)用IN-1后效果更加明顯，各組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3、脊髓損傷后雙后肢癱瘓，BBB評(píng)分，2w、3w和4w點(diǎn)BMSCs移植組、BMSCs移植聯(lián)合IN-1組移植組明顯高于損傷對照組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；BMSCs移植聯(lián)合IN-1組高于BMSCs移植組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。4、GFAP免疫組化結(jié)果顯示，BMSCs移植聯(lián)合IN-1組平均灰度值明顯小于其他兩組