消風(fēng)散治療風(fēng)熱犯表型癮疹(急性蕁麻疹)患者的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 急性蕁麻疹是一種常見的皮膚粘膜過敏性疾病，其特征為具有劇癢的一過性局限性水腫性皮疹。臨床上常呈反復(fù)發(fā)作趨勢(shì)，給患者帶來極大痛苦，對(duì)于伴有呼吸道及消化道粘膜水腫的嚴(yán)重病例，可危及生命。因此，對(duì)急性蕁麻疹的發(fā)病機(jī)制及其防治的研究已成為醫(yī)學(xué)界的重要課題?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[1]：T輔助細(xì)胞亞群(Th1/Th2)功能失衡與蕁麻疹的發(fā)病密切相關(guān)。蕁麻疹患者外周血單一核細(xì)胞(PBMC)分泌的Th1細(xì)胞因子水平下降，而Th2細(xì)胞因子水平升

2、高，經(jīng)治療后Th1/Th2細(xì)胞因子趨向平衡。蕁麻疹屬中醫(yī)“癮疹”范疇，祖國(guó)醫(yī)學(xué)歷年來保留了許多治療蕁麻疹的有效方劑，但是對(duì)它的研究大多限于臨床上的觀察，缺乏更深入的實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)選用祖國(guó)醫(yī)學(xué)中治療蕁麻疹的經(jīng)典方劑消風(fēng)散，研究它對(duì)風(fēng)熱犯表型癮疹患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分泌的Th1｜Th2細(xì)胞因子影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討，為經(jīng)典方劑消風(fēng)散治療分熱犯表型癮疹(急性蕁麻疹)提供科學(xué)的理論依據(jù)。 方法 1急性蕁

3、麻疹患者的選用標(biāo)準(zhǔn)： 1.1皮膚粘膜表面復(fù)發(fā)性風(fēng)團(tuán)，持續(xù)時(shí)間不超過24小時(shí)。 1.2每周急性發(fā)作不少于2次。 1.3病程不超過6周。 1.41周內(nèi)未使用抗組胺藥物，1月內(nèi)未使用類固醇激素藥物及免疫抑制藥物。 2急性蕁麻疹患者排除標(biāo)準(zhǔn)： 2.1排除由寒冷、壓力、振動(dòng)、日光、運(yùn)動(dòng)、情緒、摩擦等引起的物理性蕁麻疹。 2.2排除自身免疫性疾病。如甲狀腺疾病，白癜風(fēng)，胰島素依賴性糖尿病，類風(fēng)

4、濕性關(guān)節(jié)炎等。 3蕁麻疹患者中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)： 3.1風(fēng)熱犯表型：風(fēng)團(tuán)鮮紅，灼熱劇癢。伴有發(fā)燒、惡寒、咽喉腫痛，遇熱則皮疹加重。舌苔薄白或薄黃，脈浮數(shù)； 3.2風(fēng)寒束表型：皮疹色白，遇風(fēng)寒加重，得暖則減，口不渴。舌質(zhì)淡，舌苔白，脈浮緊； 3.3血虛風(fēng)燥型：反復(fù)發(fā)作，遷延日久，午后或夜間加劇。伴心煩易怒，口干，手足心熱。舌紅少津，脈沉細(xì)。 4人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離技術(shù)急性蕁麻疹患者15例和正常人5

5、例體外抽取患者新鮮靜脈血5ml，采取Ficoll等密度沉降分離法，得到淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，以RPMI1640培養(yǎng)液定容，制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度為1×106/ml。 5細(xì)胞活力的檢測(cè)方法：選用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)，以0.4％臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行染色，在3min中內(nèi)計(jì)數(shù)活細(xì)胞達(dá)95％以上。 6原代細(xì)胞的培養(yǎng)：以RPMI1640培養(yǎng)液及96孔細(xì)胞培養(yǎng)板體外培養(yǎng)，37℃置CO2培養(yǎng)箱中孵育48小時(shí)，以2000r/min離心20min，收集上清液

6、-20℃凍存待測(cè)． 7用ELISA方法檢測(cè)各組上清液的細(xì)胞因子(IL-4、IFN—γ)的含量。 8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：檢測(cè)值使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析和成對(duì)資料的t檢驗(yàn)，檢測(cè)值統(tǒng)計(jì)處理的結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X—±S)表示。 結(jié)果 1外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)和細(xì)微結(jié)構(gòu)變化觀察：T細(xì)胞在體外受到植物血凝素(PHA)的刺激后，發(fā)生一系列增生反應(yīng)，如細(xì)胞體積變大，細(xì)胞核明顯，胞漿增多，出現(xiàn)空泡，染色質(zhì)疏松

7、，有團(tuán)塊凝集現(xiàn)象，證明淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。 2PHA的最佳刺激濃度的探測(cè)：不同濃度的PHA分別刺激淋巴細(xì)胞48小時(shí)后，根據(jù)INF—γ分泌量的變化發(fā)現(xiàn)在10ug/ml左右時(shí)達(dá)到峰值，但為了保證INF—γ分泌量的穩(wěn)定性，PHA的刺激濃度最終選擇8ug/ml。 3消風(fēng)散對(duì)正常單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響：在PHA協(xié)同刺激下，各個(gè)濃度的消風(fēng)散作用于單一核細(xì)胞的OD492處理值均高于空白對(duì)照組，并且濃度在10-3g/ml～10-6g