針刺對慢性阻塞性肺疾病模型大鼠作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種復(fù)雜的炎性疾病，多種炎性細(xì)胞（巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和上皮細(xì)胞）和炎性介質(zhì)(細(xì)胞因子和活性氧(ROS))在COPD發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。
　　COPD是一種全球性的疾病，目前COPD發(fā)病的原因和機(jī)制還未完全闡明，基因遺傳背景和誘發(fā)因素（包括環(huán)境污染，吸煙，年齡，反復(fù)氣道感染等）的共同

2、作用是目前認(rèn)為可能的發(fā)病機(jī)制。其中吸煙被認(rèn)為是COPD發(fā)病的最主要因素之一。目前對于COPD的治療也沒有有效的方法，臨床治療COPD的處方藥主要是支氣管擴(kuò)張劑和吸入式皮質(zhì)激素，戒煙也是一個有效的阻止疾病進(jìn)程的辦法。
　　近來有研究表明，針刺可以改善COPD患者的生活質(zhì)量，對COPD有一定的治療作用。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作在成功制備COPD模型大鼠后，觀察到針刺可通過Orexin系統(tǒng)來調(diào)節(jié)呼吸活動，進(jìn)而部分改善肺通氣功能。但是COPD的

3、發(fā)展過程又是復(fù)雜的炎性反應(yīng)，究竟針刺是否參與抗炎反應(yīng)尚不明了。針刺與迷走神經(jīng)的關(guān)系是近年來研究的熱點(diǎn)，文獻(xiàn)報(bào)道，針刺足三里穴位可以刺激迷走神經(jīng)放電，激活膽堿能抗炎通路。國內(nèi)有實(shí)驗(yàn)證明，針刺通過激活膽堿能抗炎通路，發(fā)揮抗炎和臟器保護(hù)作用。本文利用COPD模型大鼠驗(yàn)證針刺COPD模型大鼠的作用機(jī)制，探討針刺治療COPD的神經(jīng)免疫學(xué)機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)1，利用煙熏12周制備COPD模型大鼠，觀察針刺模型大鼠肺組織學(xué)變化、肺功能變化、肺泡灌

4、洗液細(xì)胞因子以及氧化因子丙二醛(malondialdehyde，MDA)的變化，分析針刺抗炎、抗氧化作用和對肺功能的影響。
　　本實(shí)驗(yàn)2，行單側(cè)迷走神經(jīng)離斷術(shù)(vagotomy，V)，利用煙熏三周制備早期COPD模型大鼠，測定肺泡灌洗液細(xì)胞因子，觀察迷走神經(jīng)在COPD形成早期過程中的作用，并給予針刺處理，觀察針刺是否通過膽堿能抗炎反射發(fā)揮其抗炎和保護(hù)肺組織的作用。初步探討針刺治療COPD的神經(jīng)機(jī)制，以及保護(hù)肺組織免于煙熏損傷的神經(jīng)

5、免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法: 1.本研究用Sprague-Dawley(SD)大鼠(220g)制備COPD和早期COPD兩種模型大鼠。應(yīng)用香煙煙霧對大鼠進(jìn)行每日兩次煙熏，每次一小時(shí)，連續(xù)煙熏12周或3周，通過肺組織學(xué)變化確定早期COPD模型大鼠，以及大鼠肺組織的病理形態(tài)學(xué)和肺通氣功能的改變來評價(jià)COPD模型的制備成功與否。2.通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測肺泡灌洗液的腫瘤壞死因子α(Tumornecrosis factor-α，TNF-α)

6、和白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)。3.測定肺泡灌洗液丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平。4.針刺療法，選用足三里進(jìn)行針刺，每天30分鐘，持續(xù)兩周，并觀察COPD模型大鼠肺通氣功能變化，測定肺泡灌洗液細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和氧化因子MDA水平。5.迷走神經(jīng)離斷術(shù)(vagotomy，V):單側(cè)離斷迷走神經(jīng)（左側(cè)）。6.電針(electroacupuncture，EA)足三里，記錄早期COP

7、D模型大鼠迷走神經(jīng)傳出神經(jīng)纖維放電活動。
　　結(jié)果:
　　一、針刺COPD模型大鼠作用機(jī)制
　　1.煙熏12周，HE染色觀察到COPD模型大鼠肺組織呈現(xiàn)COPD病理學(xué)改變，肺泡壁增厚，肺泡腔擴(kuò)張，肺組織炎癥細(xì)胞數(shù)量增加。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明氣道阻塞明顯，支氣管和細(xì)支氣管壁增厚明顯(P＜0.01，P＜0.001);肺功能明顯降低，肺動態(tài)順應(yīng)性降低(p＜0.01)，氣道阻力增加(p＜0.01);肺泡灌洗液細(xì)胞因子TNF-α和IL-

8、1β水平都升高(P＜0.001);肺泡灌洗液氧化因子MDA水平升高(P＜0.05)。
　　2.針刺COPD模型大鼠和COPD模型大鼠相比，肺組織學(xué)變化為大鼠肺泡壁變薄、肺泡擴(kuò)張有所改善，氣道阻塞程度減輕，即支氣管和細(xì)支氣管的管壁厚度減輕(P＜0.05，P＜0.01);肺功能測定發(fā)現(xiàn)針刺以后COPD模型大鼠氣道阻力降低，肺動態(tài)順應(yīng)性改善(P＜0.05);肺泡灌洗液TNF-α和IL-1β水平都降低(P＜0.05)，但是仍高于正常大鼠(

9、P＜0.05);而肺泡灌洗液MDA水平明顯降低(P＜0.05)。
　　二、針刺早期COPD模型大鼠作用機(jī)制
　　1.單側(cè)迷走神經(jīng)離斷對正常大鼠肺組織干濕比重、肺組織病理學(xué)變化和肺泡灌洗液IL-1β水平無明顯影響(P＞0.05)。
　　2.早期COPD模型大鼠相對于正常大鼠肺組織水腫明顯，肉眼可見肺組織腫脹，肺組織干濕比重明顯變小(P＜0.001);細(xì)支氣管壁變厚明顯，出血和炎癥明顯，氣道阻塞程度增加，細(xì)支氣管厚度增加明

10、顯(P＜0.001);腫泡灌洗液IL-1β水平明顯升高(P＜0.01)，TNF-α和MDA水平無變化(P＞0.05)。
　　3.行單側(cè)迷走神經(jīng)離斷術(shù)(vagotomy，V)和單側(cè)迷走神經(jīng)假離斷術(shù)(shamvagotomy，SV)，早期COPD+V組大鼠和早期COPD+SV組大鼠對比肺組織水腫無明顯變化;肺組織干濕比重和細(xì)支氣管壁厚度無明顯變化(P＞0.05);肺泡灌洗液內(nèi)IL-1β水平升高(P＜0.05)。
　　4.早期CO

11、PD+EA模型組相對于早期COPD組大鼠肺組織干濕比重增加(P＜0.05);細(xì)支氣管壁厚度減輕(P＜0.01);肺泡灌洗液IL-1β水平下降(P＜0.01)。
　　5.電針(EA)療效，早期COPD+V+EA相對于早期COPD+SV組大鼠，肺組織干濕比重?zé)o明顯變化(P＞0.05);肺組織學(xué)支氣管厚度減輕(P＜0.001);肺泡灌洗液內(nèi)IL-1β水平無明顯改變(P＞0.05)。
　　6.針刺早期COPD模型大鼠，使迷走神經(jīng)傳出

12、纖維放電活動增加。
　　結(jié)論:
　　1.12周煙熏能成功制作COPD模型大鼠，模型大鼠肺組織損傷嚴(yán)重，肺泡間隔、支氣管和細(xì)支氣管壁厚度增加，肺通氣功能下降。符合臨床COPD患者的主要病理特點(diǎn)。
　　2.COPD模型大鼠肺泡灌洗液細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β水平升高，MDA水平升高。
　　3.早期COPD模型大鼠肺組織以炎癥為特征，水腫嚴(yán)重，出血明顯，細(xì)支氣管壁厚度增加。肺泡灌洗液內(nèi)IL-1β水平升高。