伊伐布雷定對(duì)急性病毒性心肌炎小鼠炎癥細(xì)胞因子和iNOS的影響.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)比研究伊伐布雷定和卡維地洛分別對(duì)急性病毒性心肌炎小鼠(viralmyocarditis，VMC)的心肌病理改變、心肌纖維化、TNF-α、IL-6和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)水平的異同，探討伊伐布雷定對(duì)急性病毒性心肌炎小鼠的療效及作用機(jī)制。
　　 方法:將160只4-6周齡的雄性Balb/C小鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組、心肌炎組、伊伐布雷定組和卡維地洛組，每組各40只。后3組經(jīng)腹腔接種CVB3建立急性病毒性心肌炎模

2、型，空白組腹腔注射磷酸鹽緩沖液，接種當(dāng)天記為第0天，24小時(shí)后伊伐布雷定組和卡維地洛組每日灌胃分別給予伊伐布雷定10mg/kg、卡維地洛10mg/kg，空白組給予磷酸鹽緩沖液灌胃，直至第14天末。分別于接種第7和14天隨機(jī)從各組抽取若干只小鼠取血后處死并留取心臟等標(biāo)本。小鼠心肌病理切片HE染色觀察炎癥病理改變，Masson染色檢測(cè)心肌膠原纖維化水平，半定量RT-PCR檢測(cè)心肌TNF-α和IL-6，ELISA法檢測(cè)心肌組織TNF-α和IL

3、-6蛋白水平，免疫組化檢測(cè)iNOS蛋白的表達(dá)和比色法檢測(cè)血清NO。
　　 結(jié)果:
　　 1）各組小鼠一般情況及生存率正常對(duì)照組小鼠活動(dòng)力強(qiáng)，毛色均勻有光澤，體重較前明顯增加。而接種了病毒的小鼠精神萎頓、毛發(fā)粗糙無(wú)光澤、體重減輕。
　　 2）生存率的變化正常對(duì)照組小鼠無(wú)死亡。病毒接種后隨訪14天。與病毒組相比，伊伐布雷定組和卡維地洛組小鼠的生存率顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但伊伐布雷定組和卡維地洛組

4、組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3）病毒接種后第7、14天，與病毒組相比，伊伐布雷定組和卡維地洛組的心率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但伊伐布雷定組和卡維地洛組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4)心肌病理改變與心肌炎組比，伊伐布雷定組和卡維地洛組顯著降低心肌炎癥積分和壞死積分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。伊伐布雷定組和卡維地洛組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5）心肌纖維化的比較病毒接種14天時(shí)，與

5、心肌炎組相比，伊伐布雷定組和卡維地洛組顯著降低心肌膠原容積分?jǐn)?shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6)炎癥因子基因水平的比較與正常對(duì)照組相比，接種病毒的小鼠在第7天時(shí)心肌TNF-α和IL-6 mRNA的表達(dá)明顯上調(diào)。與心肌炎組相比，藥物處理組均能顯著降低TNF-α和IL-6 mRNA的水平(P＜0.05)。第14天時(shí)，各組TNF-α和IL-6 mRNA表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 7）炎癥因子蛋白水平的比較與正常

6、對(duì)照組比，伊伐布雷定組和卡維地洛組心肌組織TNF-α和IL-6的表達(dá)水平顯著降低(P＜0.05)。在病毒接種第7天時(shí)，與病毒組比，伊伐布雷定組和卡維地洛組明顯減低TNF-α和IL-6的水平(P＜0.05)。第14天時(shí)，各組TNF-α和IL-6表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 8）免疫組化檢測(cè)心肌iNOS蛋白的表達(dá)（用累積吸光度表示）病毒感染后第7天時(shí)，卡維地洛組和伊伐布雷定組的iNOS蛋白相對(duì)表達(dá)為147.45±5.04和148.2

7、1±7.30，與心肌炎組(164.53±6.92)相比IOD值顯著減低(P＜0.01)。病毒注射后14天時(shí)伊伐布雷定組和卡維地洛組的iNOS蛋白表達(dá)為78.33±8.52和82.30±6.05，與心肌炎組(106.67±7.92)相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。正常對(duì)照組心肌未見(jiàn)iNOS的表達(dá)。
　　 9）血清NO含量的比較在病毒接種后第7、14天時(shí)，與正常對(duì)照組比，心肌炎組、伊伐布雷定組和卡維地洛組血清NO的相對(duì)含量顯著升

8、高。而與心肌炎組相比，伊伐布雷定組和卡維地洛組顯著降低血清NO的含量(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:伊伐布雷定可以顯著減輕急性病毒性心肌炎的心肌病理?yè)p傷，顯著下調(diào)TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白水平，顯著抑制iNOS導(dǎo)致的NO的表達(dá)，降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率，其在急性病毒性心肌炎中的療效與卡維地洛相當(dāng)。因此，伊伐布雷定在病毒性心肌炎中具有保護(hù)性作用，其有益作用可能部分與抑制心肌炎癥因子的表達(dá)及減輕iNOS產(chǎn)生NO的含量有