Sulfone通過轉錄因子Elk1調節(jié)人結腸癌細胞中XAF1的表達.pdf

1、背景與目的：
　　Sulfone是一個有效的結腸癌化學預防藥物。抑制ERK1/2信號通路是Sulfone體外誘導人結腸癌細胞凋亡所必需。我們的前期研究顯示，抑制ERK1/2通路可上調腫瘤抑制基因XAF1表達。Sulfone是否通過調節(jié)ER K1/2通路中相關核轉錄因子的活性直接上調XA F1的表達尚不明確。本研究旨在探討Sulfone在轉錄水平調節(jié)XAF1表達的具體作用機制。
　　方法：
　　以三種人結腸癌細胞株，p5

2、3突變型細胞株SW480、p53野生型細胞株HCT116和Lovo進行研究。在Sulfone處理前后，采用CCK-8法檢測細胞增殖變化；Hoechst33258染色法檢測細胞凋亡；蛋白印跡法檢測XAF1、磷酸化ERK1/2蛋白（pERK1/2）和ERK蛋白的表達變化；雙熒光素酶報告基因法檢測XAF1啟動子轉錄活性的變化；染色質免疫沉淀法檢測Elk1-XAF1的DNA結合活性；實時定量PCR法檢測Elk1 SiRNA干擾對XAF1 mRN

3、A表達的影響。
　　結果
　　Sulfone對HCT116、Lovo和SW480細胞的生長抑制和凋亡誘導作用呈劑量和時間依賴性。Sulfone能有效抑制以上三種細胞中ERK1/2蛋白的磷酸化，同時顯著上調XAF1蛋白的表達。核轉錄因子Elk1與XAF1的結合序列位于XAF1基因啟動子-18至-24核苷酸區(qū)域；該序列點突變后，能顯著增加Sulfone誘導的XAF1啟動子轉錄活性，而其他核轉錄因子IRF和c-ETS對XAF1啟動