稀土元素鑭、鈰對金線蘭離體培養(yǎng)的影響及機理初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  金線蘭(Anoectochilus roxburghii(Wall.) Lindl.),又名花葉開唇蘭、金線蓮、金絲草,為蘭科開唇蘭屬多年生珍稀中草藥。金線蘭具有清熱涼血、除濕解毒的功效,可治療肺結(jié)核咯血、糖尿病、腎炎、膀胱炎、重癥肌無力、遺精、風(fēng)濕性及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小兒驚風(fēng)、婦女白帶以及毒蛇咬傷等癥。特別是在民間用于治療急性腎炎、小兒驚風(fēng)和風(fēng)寒濕痹等病,療效尤為顯著。金線蘭不僅具有極高的藥用價值,同時株型小巧美觀,

2、葉形優(yōu)美,金紅色葉脈網(wǎng)狀排列,也具有極高的觀賞價值。但金線蘭在我國分布區(qū)域較窄,對生存環(huán)境依賴性高,自然蘊藏量少,且自然繁殖非常困難,加上人們的不斷采挖和對自然環(huán)境的破壞等,野生資源已近瀕危狀態(tài)。因此,為使金線蘭資源能夠可持續(xù)利用,運用植物組培技術(shù)建立金線蘭離體快繁體系,進而推動人工種植發(fā)展,能有效解決其資源短缺問題。隨著我國稀土資源在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中的應(yīng)用廣泛深入,越來越多的研究證明,適宜濃度的稀土元素對植物生長有一定的刺激作用,能促進植物

3、的新陳代謝活動,促進葉和根的生長及根系對養(yǎng)分的吸收等。因此,本研究通過將稀土元素(鑭La、鈰Ce)應(yīng)用于金線蘭的離體培養(yǎng),考察不同濃度的鑭、鈰對金線蘭離體生長的影響,改進和完善其離體再生技術(shù),從而獲得品質(zhì)優(yōu)良、生長健壯的試管苗并縮短培養(yǎng)周期。同時研究稀土鑭、鈰對金線蘭組培苗中葉綠素、根系活力、NR酶、SOD酶、POD酶、CAT酶、MDA等生理指標(biāo)含量和有效化學(xué)成分總黃酮、天麻素等含量影響,以期揭示稀土鑭、鈰對金線蘭離體生長可能的作用機理

4、。
  方法:
  本研究通過建立金線蘭離體繁殖體系,探討稀土元素鑭、鈰對金線蘭離體生長的影響以及稀土鑭、鈰對金線蘭離體生長可能的作用機理,具體包括以下工作:
  1.建立金線蘭野生種子的無菌萌發(fā)體系,并探討不同種類的基本培養(yǎng)基(MS、1/2MS、MS改良),不同種類、濃度的有機添加物和植物激素,不同外植體材料對金線蘭離體生長的影響,進而建立良好的金線蘭組培快繁體系;
  2.通過在金線蘭離體培養(yǎng)過程中添加不同濃

5、度的硝酸鑭、硝酸鈰以及對金線蘭的移栽種植的實驗研究,考察不同濃度的稀土鑭、鈰對金線蘭組培苗離體生長的影響;
  3.通過對金線蘭組培苗中葉綠素、根系活力、NR酶、SOD酶、POD酶、CAT酶、MDA等生理指標(biāo)含量的測定,初步探索稀土鑭、鈰對金線蘭離體生長和成分積累可能的作用機理;
  4.通過對金線蘭組培苗中總黃酮、天麻素等有效化學(xué)成分含量測定的研究,初步探索稀土鑭、鈰對金線蘭離體生長可能的作用機理。
  結(jié)果:

6、>  1.金線蘭離體快繁體系的建立
  成熟的金線蘭野生種子作為實驗材料接種于1/2MS培養(yǎng)基后,種子吸水膨大呈圓球狀于30d左右開始生長為黃白色球體狀原球莖,隨著時間的延長,原球莖進一步生長、發(fā)育、增殖、分化,90d左右?guī)缀跛性蚯o均形成具有1~2片小葉的翠綠色幼苗;對于不同培養(yǎng)基的篩選,金線蘭于1/2MS基本培養(yǎng)基中生長情況較在MS和改良MS基本培養(yǎng)基中生長情況要好;對于添加有機添加物對金線蘭的離體生長影響研究,結(jié)果表明,1

7、00 g/L的土豆汁、50 g/L的香蕉汁和15 g/L馬鈴薯粉對金線蘭頂芽的生長有良好的促進作用;對于添加外源激素對金線蘭離體生長的影響研究,實驗結(jié)果表明,6-BA濃度在1.0 mg/L時的試管苗生長較好,葉片較大,而且側(cè)芽數(shù)量較少,而NAA的濃度為1.5 mg/L時更有利試管苗增長;適宜金線蘭中部莖段離體生長的最適宜TDZ濃度為2.0 mg/L,而對于基部莖段,在培養(yǎng)前期(3-4個月內(nèi)),適合莖段芽增殖的TDZ濃度為4.0 mg/L

8、,在培養(yǎng)后期(4個月后),將TDZ濃度降為2.0 mg/L更適宜金線蘭基部莖段的離體生長;莖段愈傷組織最佳激素配比可初步斷定為1.0mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L ZT+0.2 mg/L2,4-D,該結(jié)果愈傷組織誘導(dǎo)率最大達到90.7%;葉片愈傷組織最佳激素配比可初步斷定為1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA+0.2 mg/L ZT+0.2 mg/L2,4-D,該結(jié)果愈傷組織誘導(dǎo)率最大達到90.

9、0%。
  2.稀土元素對金線蘭離體生長的影響研究
  在一定濃度范圍內(nèi),隨著硝酸鑭、硝酸鈰濃度的升高,稀土元素鑭、鈰對組培苗生長呈促進作用,當(dāng)超過一定濃度時,隨著硝酸鑭、硝酸鈰濃度的升高,對金線蘭的生長表現(xiàn)出抑制作用。綜合考慮,添加2.0 mg/L的硝酸鑭或硝酸鈰較適宜金線蘭初萌發(fā)小苗離體生長,其組培苗的平均株高和平均單株鮮重均達到最大值;添加5.0mg/L的硝酸鑭或2.0 mg/L硝酸鈰較適宜金線蘭頂芽的離體生長;添加1

10、.0 mg/L硝酸鈰較適宜金線蘭中部莖段的離體培養(yǎng),此時,中部莖段芽的增殖倍數(shù)為1.5倍,平均芽高為3.0 cm,且誘導(dǎo)的芽生長良好、芽體較大、莖粗壯、葉片大且深綠;適宜金線蘭基部莖段離體生長的條件為3.0 mg/L的硝酸鈰,此時,基部莖段誘導(dǎo)的芽的增殖倍數(shù)達到最大為5.1倍,平均芽高為4.5cm,且誘導(dǎo)的芽生長良好、芽體較大、莖粗壯、葉片大且深綠。本研究結(jié)果表明,適宜濃度的稀土元素鑭、鈰對金線蘭離體生長有一定的促進作用。
  3

11、.稀土元素對組培金線蘭生理指標(biāo)含量的影響研究
  在添加0~5.0 mg/L硝酸鑭、硝酸鈰的濃度范圍內(nèi),金線蘭各生理指標(biāo)含量呈現(xiàn)先增后降的趨勢,先隨稀土元素濃度上升(0~2.0 mg/L)而上升后隨濃度上升(2.0~5.0 mg/L)而下降,當(dāng)硝酸鑭和硝酸鈰的添加濃度均為2.0 mg/L時,其葉綠素含量分別高出空白對照組葉綠素含量的38.5%和44.2%;其根系活力分別是空白對照組根系活力的2.88倍和3.07倍;其NR酶活力分別

12、高出空白對照組NR酶活力的19.9%和50.7%; SOD酶活力達到最高分別為25.13 unit/mgprot和23.88 unit/mgprot,分別高出空白對照組SOD酶活力的31.4%和25.1%; CAT酶活力達到最高分別為13.73unit/mgprot和17.07 unit/mgprot,分別是空白對照組CAT酶活力的1.83倍和2.28倍;POD酶活力達到最高分別為21.22 unit/mgprot和32.89 unit

13、/mgprot,分別是空白對照組POD酶活力的1.52倍和2.35倍;而在添加0~5.0 mg/L硝酸鑭、硝酸鈰的濃度范圍內(nèi),MDA含量呈現(xiàn)先降低后增加的趨勢,先隨稀土元素濃度上升(0~2.0mg/L)而下降后隨濃度上升(2.0~5.0 mg/L)而上升,當(dāng)硝酸鑭和硝酸鈰的添加濃度均為2.0 mg/L時,其MDA含量降至最低分別為2.84 nmol/mgprot和2.99nmol/mgprot,而空白對照組MDA含量為3.48 nmol

14、/mgprot。本研究結(jié)果認(rèn)為一定濃度的硝酸鑭、硝酸鈰能增加組培金線蘭一些生理指標(biāo)含量。并初步認(rèn)為硝酸鑭、硝酸鈰對金線蘭離體生長的作用機理可能是:一定濃度稀土元素鑭、鈰能夠影響植物體內(nèi)葉綠素含量、根系活力、細胞膜透過性以及相關(guān)大分子生物酶活性,從而增強植物的光合速率、以及植物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收與利用等,最終促進植物的生長,并對植物的品質(zhì)產(chǎn)生一定的影響。
  4.稀土元素對組培金線蘭有效化學(xué)成分含量的影響研究
  在添加0~5.

15、0 mg/L硝酸鑭和硝酸鈰的濃度范圍內(nèi),金線蘭總黃酮含量呈現(xiàn)先增加后下降的變化趨勢,總黃酮含量先隨稀土元素濃度上升(0~2.0 mg/L)而上升后隨其濃度上升(2.0~5.0 mg/L)而下降。硝酸鑭實驗組以添加2.0 mg/L濃度最佳,此時金線蘭總黃酮含量為8.15 mg/g,高出未添加稀土元素組總黃酮含量的37.4%;硝酸鈰實驗組以添加2.0 mg/L濃度最佳,此時金線蘭總黃酮含量為10.48 mg/g,高出未添加稀土元素組總黃酮含

16、量的76.7%。
  結(jié)論:
  利用成熟的金線蘭野生種子作為實驗材料,建立金線蘭種子的無菌萌發(fā)體系,通過對不同基本培養(yǎng)基,不同種類、濃度的有機添加物和植物激素,不同外植體材料等影響因素的優(yōu)化篩選,改進和完善了其離體再生技術(shù),建立了良好的金線蘭組培快繁體系,并獲得了品質(zhì)優(yōu)良、生長健壯的試管苗,幫助解決了金線蘭資源短缺問題,同時為金線蘭工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持,為其資源的可持續(xù)發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。而適宜濃度的稀土元素鑭、鈰對金線蘭的

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