雙酚A誘導(dǎo)小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡的分子機制.pdf

1、目的:雙酚A(bisphenol A,BPA)是已知睪丸毒物和潛在的內(nèi)分泌干擾物。本研究初步探討青春期不同劑量BPA暴露對小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡發(fā)生的影響,且主要闡明線粒體信號通路和Fas/FasL受體通路在BPA致小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法:出生后35天(postnatal day,PND35)雄性小鼠被隨機分成對照組、低劑量BPA組和高劑量BPA組。兩個 BPA組小鼠每天被經(jīng)口灌胃分別給予 BPA(160 mg/k

2、g或480 mg/kg),對照組小鼠給予等容積玉米油,連續(xù)染毒2周,末次給藥12 h后剖殺各組雄鼠。取雙側(cè)睪丸稱重,部分睪丸被固定,制備睪丸組織切片后行常規(guī)HE染色,并用TUNEL方法對部分睪丸組織切片檢測睪丸內(nèi)生殖細(xì)胞凋亡發(fā)生情況;采用免疫印跡(immunoblotting)技術(shù)檢測雄鼠睪丸組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Fas、FasL、活性Caspase-8、Cyt c、Bax、Bcl-2、活性Caspase-9、活性Caspase-3)表

3、達。
　　結(jié)果:青春期BPA(160和480 mg/kg)暴露2周后,雄鼠體重和睪丸絕對重量均明顯降低,而青春期高劑量和低劑量BPA暴露未影響小鼠睪丸相對重量。睪丸組織病理學(xué)結(jié)果顯示,青春期兩種劑量BPA暴露均輕度減少雄鼠睪丸組織內(nèi)生精細(xì)胞層數(shù)和破壞生精細(xì)胞排列。TUNEL原位凋亡檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),青春期高劑量BPA暴露顯著促進小鼠睪丸組織細(xì)胞發(fā)生凋亡,其中以生殖細(xì)胞凋亡為主,且BPA處理組雄鼠睪丸組織中凋亡性生殖細(xì)胞主要分布在第Ⅶ-

4、Ⅷ期的生精小管內(nèi)。為了研究Fas/FasL受體通路在BPA致小鼠睪丸組織生殖細(xì)胞凋亡中的作用,本課題用免疫印跡技術(shù)檢測Fas/FasL受體通路相關(guān)蛋白表達。本研究結(jié)果表明,青春期BPA暴露引起雄鼠睪丸組織Fas和FasL蛋白表達水平均明顯升高,且呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。此外,青春期雄鼠接觸BPA后,其睪丸組織內(nèi)活性Caspase-8和活性Caspase-3蛋白表達均顯著上調(diào)。為了探討線粒體信號通路在BPA致小鼠睪丸組織生殖細(xì)胞凋亡中的作用,

5、本課題用免疫印跡技術(shù)檢測線粒體信號通路相關(guān)蛋白表達。結(jié)果顯示,青春期 BPA暴露(160或480 mg/kg)后,雄鼠睪丸組織細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞質(zhì)中Cyt c含量均明顯增加,而線粒體中Cyt c含量卻顯著降低。此外,青春期BPA暴露引起小鼠睪丸組織細(xì)胞內(nèi)活性Caspase-9的蛋白表達明顯上調(diào)。進一步研究結(jié)果表明,青春期BPA暴露明顯上調(diào)雄鼠睪丸組織細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達,且呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。此外,青春期高劑量BPA暴露后,雄鼠睪丸組織線粒體內(nèi)

6、Bax蛋白表達水平較對照組顯著升高。最后,青春期高劑量BPA暴露盡管明顯上調(diào)雄鼠睪丸組織細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達,但是青春期高劑量BPA處理組雄鼠睪丸組織內(nèi)促凋亡蛋白Bax與抗凋亡蛋白Bcl-2的光密度比值較對照組顯著增加。
　　結(jié)論:青春期BPA暴露引起小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡,且發(fā)生凋亡的生殖細(xì)胞主要分布于睪丸組織內(nèi)成熟期生精小管(第VII-VIII期)內(nèi)。Fas/FasL受體通路和線粒體信號通路均可能不同程度地參與BPA引起睪丸