脂肪細(xì)胞AMPK與TLR-NF-κΒ信號通路交互作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究脂肪細(xì)胞AMPK激活對免疫炎癥信號通路TLR4/NF-кB活性及炎癥因子（IL-6、TNF-a、FFA）的影響及脂肪細(xì)胞免疫炎癥信號通路TLR4/NF-кB處于激活狀態(tài)下，對AMPK活性的影響，為闡明肥胖啟動炎癥的分子機(jī)制和治療肥胖及肥胖相關(guān)疾病提供新的基礎(chǔ)理論和實驗依據(jù)。
　　方法：培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，實驗分為兩部分，第一部包含空白對照組，CompoundC組，AICAR組，第二部包含空白

2、對照組，LPS組，尼古丁組。1.Westeronblot檢測空白對照組NF-кBp65和AMPK磷酸化水平。2.AICAR（或CompoundC）作用脂肪細(xì)胞1小時，Westeronblot檢測脂肪細(xì)胞NF-кBp65和AMPK磷酸化水平，ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥因子IL-6與TNF-a表達(dá)水平；比色法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中FFA含量。3.LPS（或尼古?。┳饔弥炯?xì)胞1小時，Westeronblot檢測脂肪細(xì)胞AMPK和NF-кBp6

3、5磷酸化水平。
　　結(jié)果：
　　[1]AICAR作用于成熟脂肪細(xì)胞后，AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著增高（P<0.01），NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01）。
　　[2]CompoundC作用于成熟脂肪細(xì)胞后，AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01），NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組升高（P<0.05）。
　　[3]細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6分泌表達(dá)水平AICAR組較

4、空白對照組降低（P<0.05），而CompoundC組較空白對照組升高（P<0.05）。空白組為112.33±4.932pg/ml，AICAR組為84.33±4.509pg/ml，CompoundC組為141.667±11.5036pg/ml。
　　[4]TNF-a表達(dá)水平AICAR組平較空白對照組顯著降低（P<0.01），CompoundC組較空白對照組升高（P<0.05）空白組為177.6667±2.5166），ARCAR組為

5、115.6667±4.509pg/ml，CompoundC組為194.667±5.5076pg/ml。
　　[5]FFA含量ARCAR組較空白對照組顯著降低（P<0.01），CompoundC組較空白對照組顯著升高（P<0.01）。空白組為174.01±2.01502μmol/L，ARCAR組為107.73±2.18831μmol/L，CompoundC組為765.20±3.23-7414μmol/L。
　　[6]LPS作用

6、于成熟脂肪細(xì)胞后，NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組顯著增加（P<0.01），AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著降低（P<0.01）。
　　[7]尼古丁作用于成熟脂肪細(xì)胞后，NF-кBp65磷酸化水平較空白對照組降低（P<0.05），AMPK磷酸化水平較空白對照組顯著增加（P<0.01）。
　　結(jié)論：本實驗明確了AMPK與NF-κΒ之間存在負(fù)相關(guān)作用，肥胖時機(jī)體出現(xiàn)的慢性炎癥狀態(tài)可能與AMPK活性降低，NF-κΒ信號增強(qiáng)