雌激素對(duì)大鼠腎臟缺血再灌注損傷的影響及對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮酶表達(dá)的影響.pdf

1、腎缺血再灌注損傷是腎臟移植中不可避免的病理生理過(guò)程。同時(shí)在臨床上，如急性缺血性腎功衰竭、心肺復(fù)蘇、心臟體外循環(huán)、失血性休克、需暫時(shí)阻斷腎血流的手術(shù)等，均可導(dǎo)致腎缺血再灌注損傷。急性缺血所引起的急性腎小管壞死(ATN)是急性腎功能衰竭(ARF)常見類型，在其他原因引起的ARF中，腎臟缺血/再灌注(I/R)損傷也起重要作用。一般認(rèn)為，任何原因引起的急性腎衰都在不同程度上存在著腎血流灌注量減少和腎血管尤其是腎小球前血管收縮加強(qiáng)。腎臟缺血最根本

2、的治療措施就是恢復(fù)血供，但血供重建將引起組織的進(jìn)一步損傷。有研究表明與肝臟、心、腦缺血/再灌注損傷密切相關(guān)的有超氧化物歧化酶(SOD)、脂質(zhì)過(guò)氧化酶、內(nèi)皮素-1、一氧化氮(NO)等物質(zhì)，雌激素通過(guò)調(diào)節(jié)這些物質(zhì)對(duì)缺血再灌注損傷(IRI)產(chǎn)生保護(hù)作用。內(nèi)皮型一氧化氮酶(NOS)在腎中含量較高，主要存在于腎血管內(nèi)皮細(xì)胞，許多物質(zhì)和生理/病理刺激可調(diào)節(jié)eNOS的表達(dá)，增加NO的合成和釋放。從而減輕I/R損傷。本實(shí)驗(yàn)利用免疫組化探討苯甲酸雌二醇對(duì)

3、腎缺血再灌注損傷(RIRI)的保護(hù)作用及RIRI后eNOS的表達(dá)。 目的:探討雌激素對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷中內(nèi)皮型一目的探討雌激素對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷中內(nèi)皮型一氧化氮酶的表達(dá)及對(duì)SOD活性的保護(hù)作用。為臨床治療腎臟缺血再灌注損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)。 方法:健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，體重300-350g，隨機(jī)將75只SD大鼠分為假手術(shù)組(A組n=25)、缺血再灌注組(B組n=25)和雌激素處理組(

4、C組n=25)。A、B兩組在術(shù)前3天每天腹腔注射生理鹽水2ml，C組在術(shù)前3天每天腹腔注射40mg/kg/d。將大鼠以0.4％氯胺酮100mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉后，沿腹部正中切口進(jìn)腹，小心分離雙側(cè)腎蒂，B組和C組大鼠無(wú)損傷動(dòng)脈夾阻斷雙側(cè)腎蒂，造成雙腎缺血，45分鐘后松開動(dòng)脈夾，實(shí)行再灌注?？p合切口，自由攝食，自然光照。于再灌注24h活體摘取左腎，左腎背面下半部，稱0.2克濕組織放入玻璃勻漿器中，加入0.05mol/L磷酸緩沖液(含0.

5、1mmol/LEDTA,PH7.8)，冰浴中制成10％的組織勻漿。切取再灌注24h大鼠左腎的1/3，固定于2.5％戊二醛磷酸緩沖液中，行透射電鏡檢查。剩余部分福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片，以備常規(guī)染色和免疫組化用。心臟取血3ml，備血腎功能檢查。假手術(shù)組以相同手術(shù)方法暴露雙側(cè)腎臟并分離腎周組織，不夾閉雙側(cè)腎蒂，其處理與缺血再灌注組相同。用酶法測(cè)再灌注后24h血BUN，Cr；福爾馬林液固定左腎組織，常規(guī)石蠟切片，作HE染色，在HB-2型Ol

6、ympus光學(xué)顯微鏡下觀察其組織學(xué)改變，按paller標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分；測(cè)定腎組織SOD活性；采用免疫組織化學(xué)SABC法，測(cè)定腎細(xì)胞胞漿內(nèi)eNOS的表達(dá)，凡胞漿中有黃褐色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞。采用MIAS-圖像分析系統(tǒng)作NOS蛋白定量分析；2.5％戊二醛磷酸緩沖液固定左腎組織，按透射電鏡標(biāo)本合、切片、染色等步驟，在日立H7500電鏡下觀察其超微結(jié)構(gòu)改變；結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，所有數(shù)據(jù)均在微機(jī)上用spss11.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成。采用方法：計(jì)量資料采