克隆豬與人工授精豬胎盤(pán)發(fā)育的比較研究.pdf

1、克隆又稱(chēng)體細(xì)胞核移植(SCNT)，該技術(shù)已在多種哺乳動(dòng)物中成功建立并被逐漸應(yīng)用。目前，豬的體細(xì)胞克隆仍然有很多問(wèn)題，首先，豬的克隆效率不足1％；其次，超過(guò)50%的克隆仔豬在斷奶前死亡。這兩個(gè)主要問(wèn)題嚴(yán)重制約著豬克隆技術(shù)的發(fā)展。胎兒的宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育高度依賴(lài)于胎盤(pán)的形態(tài)大小和功能。很多研究表明，胎盤(pán)發(fā)育缺陷是抑制克隆胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的主要原因之一。但是克隆動(dòng)物產(chǎn)后的高死亡率與胎盤(pán)異常的相關(guān)性研究只在個(gè)別克隆哺乳動(dòng)物中有報(bào)道，目前還沒(méi)有研究報(bào)道胎盤(pán)

2、發(fā)育狀況與克隆豬出生后存活率的關(guān)系。因此，研究掌握克隆豬胎盤(pán)的發(fā)育狀況將對(duì)改善或提高豬的克隆效率以及出生后存活率具有重要意義。
　　本研究通過(guò)比較克隆豬與人工授精豬（AI）的胎盤(pán)相關(guān)性狀、組織形態(tài)、基因mRNA及蛋白表達(dá)水平，從而探究胎盤(pán)發(fā)育狀況與克隆豬產(chǎn)后存活率的關(guān)聯(lián)性。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）克隆豬的窩均產(chǎn)仔數(shù)明顯低于人工授精豬（4.5頭VS.11.8頭），克隆豬的死胎率和出生后4天內(nèi)的死亡率分別達(dá)到20.7%和5

3、1.7%。
　　（2）出生活的克隆豬與AI豬的仔豬出生重和胎盤(pán)發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較顯示，S-LB組的仔豬出生重、胎盤(pán)面積、胎盤(pán)效率均顯著低于A-LB組，而胎盤(pán)重?zé)o顯著差異；出生4天的比較分析結(jié)果顯示，S-DW4組的仔豬出生重、胎盤(pán)重、胎盤(pán)面積均顯著低于S-SO4組和A-SO4組，但是S-SO4組和S-DW4組的胎盤(pán)效率顯著低于A-SO4組。
　?。?）性狀間相關(guān)性分析可知克隆豬出生時(shí)和出生4天后的存活率均與仔豬出生重、胎盤(pán)重、胎

4、盤(pán)面積呈極顯著的正相關(guān)，且仔豬出生重與胎盤(pán)重、胎盤(pán)面積、胎盤(pán)效率均呈極顯著的正相關(guān)。
　　（4）胎盤(pán)組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)表明S-SO4組的胎盤(pán)發(fā)育狀況接近于AI豬，但S-DW4組的胎盤(pán)組織形態(tài)有明顯的異常，包括微絨毛數(shù)量不足、細(xì)胞滋養(yǎng)層發(fā)育異常等。臍帶形態(tài)鑒定顯示S-LB組的臍帶異常率顯著高于A-LB組。然而S-SO4組的臍帶異常率與A-SO4組無(wú)明顯差異，但顯著低于S-DW4組。
　　（5）mRNA表達(dá)及蛋白水平檢測(cè)結(jié)果表明S-

5、SO4組胎盤(pán)的印跡基因和非印跡基因的mRNA表達(dá)量基本上與A-SO4組無(wú)顯著差異，而S-DW4組胎盤(pán)中的這些基因的mRNA表達(dá)量出現(xiàn)顯著上調(diào)或下調(diào)，且蛋白檢測(cè)分析顯示S-DW4組的Cu-ZnSOD蛋白的表達(dá)異常，暗示這類(lèi)胎盤(pán)容易遭受氧化應(yīng)激，mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)失調(diào)導(dǎo)致胎盤(pán)的形態(tài)異常和功能受損。
　　綜上所述，大量克隆豬出生后死亡很大程度上與仔豬出生重偏低有關(guān)，胎盤(pán)的形態(tài)異常和功能缺陷是導(dǎo)致克隆豬宮內(nèi)發(fā)育不良的主要源頭。因此，改