東北區(qū)狍遺傳多樣性及性別基因鑒定研究.pdf

1、狍是一種重要的狩獵動物，在中國東北地區(qū)分布廣泛。但由于過量捕獵，野生種群數(shù)量急劇減少。所以，對狍的遺傳多樣性以及種群遺傳結(jié)構(gòu)進行研究，保護好有限的野生狍資源是一項緊迫的任務。 分子水平的研究是目前進行野生動物遺傳變異研究較為準確的遺傳標記。有關東北區(qū)狍遺傳標記研究尚未見報道，直接使用DNA序列分析探索野生狍遺傳變異也僅見于國外學者對歐洲狍和西伯利亞狍的研究。本研究試圖通過RAPD標記和線粒體DNA測序，對存在于核內(nèi)及核外的遺傳物

2、質(zhì)變異情況進行研究，同時對鹿類動物的系統(tǒng)發(fā)育進行分析。通過狍Sry基因PCR擴增和測序，對狍的性別決定機制進行研究，進而對野生狍自然種群的性別結(jié)構(gòu)作出評估。 在RAPD標記分析中，從80個隨機引物中篩選20個對32個狍樣本進行了擴增，每個引物擴增出2～8個明顯的片斷，共檢出123條帶，114條帶表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)百分率92.7％。多態(tài)條帶比率(PPB)、Shannon多樣指數(shù)及Nei基因多樣性指數(shù)(h)均顯示東北狍較為豐富的遺傳

3、多樣性。東北地區(qū)長白山、大興安嶺和完達山3個地理種群中，大興安嶺種群遺傳多樣性最低。UPGMA聚類分析能夠清楚區(qū)分3個地理居群的個體，多態(tài)條帶表型的主座標分析(PCA)更直觀地展現(xiàn)了這一結(jié)果。在進行居群遺傳分化分析時，采用Nei遺傳距離、Gst基因分化系數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)的階層分析和AMOVA遺傳變異巢式分析等多種方法，結(jié)果顯示東北狍種群分化程度不高，遺傳變異主要來自種群內(nèi)。 線粒體DNA是核外遺傳物質(zhì)，由于其分子結(jié)構(gòu)

4、簡單、進化速率快等特點常被用來進行遺傳多樣性分析和系統(tǒng)發(fā)育研究。本研究對16個狍樣本mtDNAD-loop區(qū)序列進行了測定，經(jīng)鑒定舍棄其中4條序列。12個樣本獲待了614bp的序列片斷，在可比較的562bp序列中，存在40個變異位點，多態(tài)位點的比例為7.12％，其中20個是單態(tài)位點，20個是簡約化信息位點，轉(zhuǎn)換38個，顛換2個。此外還存在2個未測出位點，3個插入/缺失位點。共檢測到12種單元型，單元型間的序列差異平均為2.00％。核苷酸

5、多樣度(π)比較低，僅有0.0204。AMOVA分析，有58.09％的變異來自種群內(nèi)，結(jié)果與RAPD分析完全一致。mtDNAD-loop數(shù)據(jù)支持將東北區(qū)狍歸為Capreoluspygargus種下的一個亞種(Capreoluspygargusmantschuricus)，Capreoluspygargus與Capreoluscapreolus互為獨立種。通過構(gòu)建系統(tǒng)樹和單元型網(wǎng)絡關系圖確定各群體間的關系。 本研究測定了東北狍mt

6、DNACytb基因445bp序列片斷，結(jié)合GenBank相關序列資源對2科12屬18種鹿類動物的系統(tǒng)發(fā)育樹進行了重建。最大簡約法、最大似然法和貝葉斯法3種方法構(gòu)建的基因樹的拓撲結(jié)構(gòu)基本一致。結(jié)果表明，狍是美洲鹿亞科中分化較早的類群；在鹿科動物4個亞科中獐是最為原始的種類，其次是美洲鹿和麂，而鹿是進化程度較高的類型。 用人的SRY基因篩選出的一對引物成功對狍Sry基因進行了PCR擴增，擴增結(jié)果顯示性別特異性。同時，本研究首次對狍S