FFAR1在吡格列酮拮抗棕櫚酸誘導(dǎo)的β細(xì)胞脂毒性凋亡和氧化應(yīng)激的作用.pdf

1、目的：
　?。?）觀察FFAR1是否參與PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡的作用；
　?。?）探討FFAR1介導(dǎo)PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡與氧化應(yīng)激的關(guān)系；
　?。?）研究FFAR1發(fā)揮介導(dǎo)效應(yīng)是否通過PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號通路。
　　方法：
　?。?）以對葡萄糖敏感的小鼠胰島β細(xì)胞系（βTC6）作為研究對象，應(yīng)用RNAi慢病毒載體(siRNA)或FFAR1過表達(dá)慢病毒載體(FFAR1+)轉(zhuǎn)染βTC

2、6細(xì)胞以調(diào)控FFAR1基因表達(dá)；1.0 mmol/L棕櫚酸（PA）干預(yù)β細(xì)胞24小時(shí)，建立脂毒性β細(xì)胞模型，不同濃度PIO干預(yù)β細(xì)胞不同時(shí)間段；以觀察FFAR1對PIO拮抗β細(xì)胞脂毒性凋亡的影響。
　　（2）PIO干預(yù)無轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染慢病毒（siRNA或FFAR1+）的脂毒性β細(xì)胞；同時(shí)設(shè)置H2O2誘導(dǎo)的β細(xì)胞損害作為氧化應(yīng)激的陽性對照；分析FFAR1介導(dǎo)PIO保護(hù)作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系。
　?。?）調(diào)控FFAR1的表達(dá)或運(yùn)用阻滯

3、劑抑制信號蛋白活性，并以FFAR1的特異激動劑 TAK-875干預(yù)脂毒性β細(xì)胞作為對照，觀察 FFAR1發(fā)揮效應(yīng)與 PLCγ-ERK1/2-PPARγ信號級聯(lián)的關(guān)系。
　　（4）技術(shù)手段：流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL檢測β細(xì)胞的凋亡；RT-PCR檢測FFAR1基因的表達(dá)；Western blot檢測FFAR1，氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白（NAPDH氧化酶亞基p47phox，bcl-2，Bax，cleaved caspase3）和信號因子（PLCγ

4、，ERK1/2，PPARγ）的表達(dá)；DCFH-DA探針檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧含量，ELISA檢測細(xì)胞內(nèi)IP3水平。
　　結(jié)果：
　?。?)PIO可呈濃度和時(shí)間依賴性改善脂毒性導(dǎo)致的β細(xì)胞凋亡和FFAR1表達(dá)抑制；沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可減弱PIO改善脂毒性導(dǎo)致的β細(xì)胞凋亡，而誘導(dǎo)FFAR1表達(dá)，則可增強(qiáng)PIO抗β細(xì)胞凋亡的作用；FFAR1表達(dá)水平與β細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)。
　?。?）沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可減弱 PIO對脂毒性誘導(dǎo)的NA

5、PDH氧化酶亞基p47phox， Bax，cleaved caspase3表達(dá)和ROS產(chǎn)生的抑制以及對bcl-2表達(dá)的上調(diào)作用；而誘導(dǎo)FFA1R高表達(dá)則可增強(qiáng)PIO上述拮抗氧化應(yīng)激的作用。同樣，這種效應(yīng)也發(fā)生在H2 O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激上。
　?。?）PIO或TAK-875均可上調(diào)脂毒性導(dǎo)致的PLCγ，ERK1/2，PPARγ表達(dá)抑制和細(xì)胞內(nèi)IP3水平的下降；而沉默F(xiàn)FAR1表達(dá)可削弱PIO上調(diào)上述蛋白表達(dá)的作用；誘導(dǎo)FFAR1過表