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文檔簡介
1、目的:探討磷酸化STAT3在急性胰腺炎并發(fā)肺損傷后表達(dá)的意義,為臨床及基礎(chǔ)發(fā)展作出一定的貢獻(xiàn)。
方法:將昆明白、ICR、Balb/C3種不同品系小鼠各12只腹腔內(nèi)注射雨蛙素誘導(dǎo)并建立急性胰腺炎并發(fā)肺損傷模型,雨蛙素(50μg/kg)稀釋于生理鹽水中,每小時注射1次,連續(xù)腹腔注射12h、20h;對照組腹腔注射等量生理鹽水(0.2ml)。各組末次注射后1h下腔靜脈取血測血淀粉酶,取胰腺、肺臟組織行病理學(xué)檢查。觀察不同品系小鼠注射雨
2、蛙素12 h、20h后胰腺、肺組織形態(tài)學(xué)及血淀粉酶水平差異,選擇適合本實驗的模型小鼠;根據(jù)前面的實驗結(jié)果,采用合適的模型小鼠作為動物材料,12只雄性健康小鼠實驗組、對照組各6只,末次注射后1h立即解剖小鼠,胰頭、右下肺病理檢查及免疫組化,胰腺體尾部及余肺組織行westernblots測定磷酸化STAT3蛋白表達(dá)水平;最后通過阻斷STAT3磷酸化觀察組織損傷程度的變化,18只雄性小鼠,隨機(jī)分為組1對照組(6只);組2急性胰腺炎并發(fā)肺損傷組
3、(APALI6只);組3雷帕霉素處理組(6只),于誘導(dǎo)急性胰腺炎并發(fā)肺損傷末次注射雨蛙素前1h注射。末次注射后1h立即解剖胰腺及肺組織,胰頭、右下肺病理檢查及免疫組化,胰腺體尾部及余肺組織行westernblots測定磷酸化STAT3蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:Balb/C12h、20h實驗組及昆明白20h實驗組造模成功:胰腺腺泡廣泛變性、壞死及空泡化;炎癥細(xì)胞大量浸潤。肺部間質(zhì)及部分肺泡腔有炎細(xì)胞浸潤、肺不張、肺泡間隔增寬。昆明白
4、12h實驗組及ICR20h實驗組僅出現(xiàn)胰腺輕微損傷,未見肺組織變化。造模成功組中Balb/C12h、20h實驗組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05); Balb/C12 h實驗組與昆明白20 h實驗組病理學(xué)評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。各品系內(nèi)12h、20h實驗組與相應(yīng)對照組血淀粉酶比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Balb/C小鼠對藥物反應(yīng)靈敏,用藥量少,節(jié)約時間與成本,更適用于急性重癥胰腺炎模型的研究。免疫組化:對照
5、組可見磷酸化STAT3呈極微弱陽性表達(dá),少數(shù)分布于肺泡、支氣管上皮細(xì)胞、胰腺實質(zhì)。實驗組可見肺、胰腺組織磷酸化STAT3強(qiáng)陽性表達(dá),遍布肺泡上皮、支氣管上皮、胰腺實質(zhì)細(xì)胞及浸潤的炎癥細(xì)胞,胰腺組織中胰島細(xì)胞核染明顯。Westernblots:與對照組相比,實驗組可見胰腺、肺組織中出現(xiàn)明顯的磷酸化STAT3表達(dá)的信號,光密度掃描結(jié)果顯示,實驗組胰腺的磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度是對照組2.23倍(p<0.05)肺組織磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度分
6、別是對照組2.21倍(p<0.05)。雷帕霉素處理后急性胰腺炎的損失程度減輕,免疫組化提示對照組可見磷酸化STAT3呈極微弱陽性表達(dá),少數(shù)分布于肺泡、支氣管上皮細(xì)胞、胰腺實質(zhì);實驗組可見肺、胰腺組織磷酸化STAT3強(qiáng)陽性表達(dá),遍布肺泡上皮、支氣管上皮、胰腺實質(zhì)細(xì)胞及浸潤的炎癥細(xì)胞,胰腺組織中胰島細(xì)胞核染明顯。處理組可見肺、胰腺組織磷酸化STAT3表達(dá)量較實驗組減少。Westernblots:與對照組相比,實驗組可見胰腺、肺組織中出現(xiàn)明顯
7、的磷酸化STAT3表達(dá)的信號,光密度掃描結(jié)果顯示,實驗組胰腺的磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度是對照組2.23倍(p<0.05),處理組胰腺的磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度是對照組1.51倍(p<0.05);實驗組肺組織磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度分別是對照組2.21倍(p<0.05),處理組肺組織磷酸化STAT3表達(dá)強(qiáng)度分別是對照組1.52倍(p<0.05)。
結(jié)論:在急性胰腺炎并發(fā)肺損傷中磷酸化STAT3蛋白被激活,炎癥晚期通過減少磷酸化S
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