馬兜鈴酸-DNA加合物合成及質(zhì)譜分析方法研究.pdf

1、目的：中藥馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)被發(fā)現(xiàn)有致突變、致腫瘤性，研究認(rèn)為其與馬兜鈴酸-DNA(aristolochic acid-DNA，AA-DNA)加合物有關(guān)。建立簡便快速準(zhǔn)確檢測AA-DNA加合物的方法，對進一步研究其生物化學(xué)特性和生物學(xué)行為有重要意義。 本文擬體外合成并分別采用高效液相色譜．電噴霧線形離子阱串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-ESI/MS/MS)技術(shù)與傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(FT-ICRMS)鑒定

2、AA-DNA加合物，分析研究其質(zhì)譜行為，探討該類化合物結(jié)構(gòu)特征與質(zhì)譜裂解行為之間的相關(guān)性，歸納與總結(jié)這類化合物的質(zhì)譜裂解特征，最終建立簡便快速準(zhǔn)確檢測AA-DNA加合物的質(zhì)譜檢測方法。 方法：AA經(jīng)酶活化法或化學(xué)活化法活化后分別與脫氧腺苷酸或脫氧鳥苷酸反應(yīng)生成AA-DNA加合物，優(yōu)化并最終確立了合成反應(yīng)條件。應(yīng)用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(LC/MS/MS)技術(shù)對合成的AA-DNA加合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，優(yōu)化質(zhì)譜檢測模式及參數(shù)，詳細(xì)分析加合

3、物的質(zhì)譜行為，在此基礎(chǔ)上采用混合物直接進樣的電噴霧-多級質(zhì)譜(ESI-MS<'n>)與LC-MS<'n>等方法，進一步研究AA-DNA加合物在負(fù)離子模式的電噴霧電離條件下的質(zhì)譜裂解特征。應(yīng)用FT-ICRMS精確質(zhì)量數(shù)測定和同位素模式檢測進一步對合成的AA-DNA加合物進行鑒定。在此基礎(chǔ)上建立質(zhì)譜法檢測AA-DNA加合物的方法。 結(jié)果：采用酶活化法或化學(xué)活化法分別成功合成脫氧腺苷-AAⅠ、脫氧腺苷-AAⅡ、脫氧鳥苷-AAⅠ和脫氧鳥

4、苷-AAⅡ加合物，電噴霧線形離子阱質(zhì)譜負(fù)離子采集模式下信號響應(yīng)較好，測得其準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z621、m/z 591、m/z 637與m/z 607。ESI-MS/MS譜圖提供了豐富的結(jié)構(gòu)信息，且四種加合物L(fēng)C/MS<'n>多級質(zhì)譜裂解方式相似。FT-ICRMS負(fù)離子采集模式下分別獲得加合物的精確質(zhì)量數(shù)，提供的分子式與加合物分子式相符。同位素模式顯示加合物同位素峰簇與相對豐度實測值分別與理論值相符。 結(jié)論：AA能在體外分別與