溫陽(yáng)活血方對(duì)UUO大鼠腎組織MMP-3、TIMP-1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腎間質(zhì)纖維化(renal interstitium fibrosis，RIF)是多種原因所致的腎臟疾病發(fā)展至終末期的共同病理表現(xiàn)，是以大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)在腎間質(zhì)的過(guò)度沉積為主要特征。研究表明腎功能受損與小管間質(zhì)損傷密切相關(guān)，其影響程度大于腎小球病變程度的影響?；|(zhì)金屬蛋白酶(marixmetalloproteinases，MMPs)是ECM蛋白降解酶的一種，是調(diào)節(jié)ECM動(dòng)態(tài)平衡的重要酶類，

2、金屬蛋白酶組織抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)為MMPs特異性抑制因子。MMPs/TIMPs比例失衡導(dǎo)致了小管間質(zhì)ECM轉(zhuǎn)換失衡，故調(diào)節(jié)兩者比例平衡是延緩腎纖維化的重要手段之一。 溫陽(yáng)活血方是由肉蓯蓉、仙靈脾、紅花、桃仁、丹皮等組成，具有溫腎壯陽(yáng)，活血化瘀之效，臨床證明該方對(duì)于防治腎小管間質(zhì)纖維化，保護(hù)。腎功能起有益作用。為了探討該方對(duì)RIF的治療作用，我們以單側(cè)

3、輸尿管梗阻(unilateral ureteralobstruction，UUO)誘導(dǎo)的RIF大鼠模型，研究ECM的降解與小管間質(zhì)損害的關(guān)系并觀察該方對(duì)腎臟組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-3(marix metalloproteinases-3，MMP-3)、金屬蛋白酶組織抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1，TIMP-1)、纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)及腎小管標(biāo)志蛋白表達(dá)的

4、影響，以期為臨床防治腎纖維化提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容概括如下： 1．MMP-3、TIMP-1與腎問(wèn)質(zhì)纖維化的相關(guān)性研究材料與方法：健康雄性Wistar大鼠32只，體重為150～200克。隨機(jī)將大鼠分為假手術(shù)組(n=8)和造模組(n=24)兩組，再將造模后大鼠隨機(jī)分為3組：UUO 7天組(n=8)、UUO 14天組(n=8)、UUO 21天組(n=8)，造模組行左側(cè)輸尿管結(jié)扎。于實(shí)驗(yàn)第7天、14天、21天分別殺檢，觀察uu

5、o術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)腎小管間質(zhì)病理改變及MMP-3、FIMP-1、FN的表達(dá)部位、變化情況及與小管間質(zhì)損害的關(guān)系。結(jié)果與討論：發(fā)現(xiàn)隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，腎小管間質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸增多，并出現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞水腫、變性、壞死，腎小管擴(kuò)張，間質(zhì)間隙增寬，成纖維細(xì)胞增殖，纖維化程度呈進(jìn)行性增加。 MMP-3、TMP-1主要分布于腎小管上皮細(xì)胞胞漿中，間質(zhì)細(xì)胞中亦有表達(dá)；FN主要分布于。腎小管周圍和腎間質(zhì)基質(zhì)中，在小血管周圍和管壁中也有表達(dá)。隨

6、著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)MMP-3的表達(dá)量先增高，14～21天逐漸降低至假手術(shù)組水平，TIMP-1、FN的表達(dá)量顯著增高，MMP-3/TIMP-1比例呈下降趨勢(shì)；TIMP-1、FN的表達(dá)與腎小管間質(zhì)纖維化程度成正相關(guān)，MMP-3/TIMP-1與腎小管間質(zhì)纖維化程度成負(fù)相關(guān)。 2．溫陽(yáng)活血方對(duì)腎間質(zhì)MMP-3、TIMP-1、FN影響的實(shí)驗(yàn)研究材料與方法：雄性Wistar大鼠32只，體重為150～200克。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)大鼠分為假手術(shù)組(n=8

7、)和造模組(n=24)兩組，再將造模后動(dòng)物隨機(jī)分為3組：溫陽(yáng)活血治療組(n=8)、蒙諾治療組(n=8)、UUO模型組(n=8)(即第一部分UUO14天組)。各造模組予手術(shù)后24小時(shí)開始灌胃給藥，分別于術(shù)后14天殺檢。觀察各組大鼠。腎臟病理改變、MMP-3、TIMP-1、FN在腎小管間質(zhì)的表達(dá)以及腎功能、腎小管標(biāo)志蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果與討論：發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組腎臟未見病理改變，模型組可見腎小管上皮細(xì)胞大量萎縮、空泡變性，皮質(zhì)和近髓萎縮

8、腎小管較多，間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，并出現(xiàn)間質(zhì)纖維化明顯。而蒙諾治療組、溫陽(yáng)活血治療組間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞呈小灶性浸潤(rùn)，腎小管上皮細(xì)胞變性萎縮及問(wèn)質(zhì)纖維化范圍比UUo模型組小。假手術(shù)組中MMP-3有少量表達(dá)，造模各組MMP-3的表達(dá)均高于假手術(shù)組，溫陽(yáng)活血治療組和蒙諾治療組的表達(dá)水平明顯高于模型組，而溫陽(yáng)活血治療組與蒙諾治療組兩者無(wú)明顯差異；TIMP-1、FN在假手術(shù)組僅有少量表達(dá)，造模各組均有不同程度的表達(dá)，與假手術(shù)組相比造模各組的表達(dá)水平均

9、明顯增高，溫陽(yáng)活血治療組、蒙諾治療組較之模型組表達(dá)水平明顯降低，TIMP-1的表達(dá)在溫陽(yáng)活血治療組與蒙諾治療組間無(wú)明顯差異，但蒙諾治療組FN的表達(dá)低于溫陽(yáng)活血治療組。造模各組尿素氮、尿視黃醇結(jié)合蛋白(retinol binding protein，RBP)水平均有增高，其中模型組與假手術(shù)組相比有顯著性差異。溫陽(yáng)活血治療組和蒙諾組與UUO模型組相比有明顯降低，溫陽(yáng)活血治療組和蒙諾治療組間無(wú)明顯差異。各組肌酐水平無(wú)明顯差異。 結(jié)論：

10、通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn)隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，MMP-3表達(dá)先增多，14～21天逐漸降低至假手術(shù)組水平，TIMP-1、FN表達(dá)逐漸增多，MMP-3/TIMP-1比例呈下降趨勢(shì)；TIMP-1、FN的表達(dá)與。腎小管問(wèn)質(zhì)纖維化程度成正相關(guān)，MMP-3/TIMP-1與腎小管間質(zhì)纖維化程度成負(fù)相關(guān)。MMP-3/TIMP-1比例失衡是腎間質(zhì)纖維化發(fā)展的重要原因，而溫陽(yáng)活血方可顯著恢復(fù)MMP-3表達(dá)水平，降低TIMP-1、FN的表達(dá)水平，以此來(lái)調(diào)節(jié)MMP-3/