13942.結(jié)核分枝桿菌mazg功能及毒力研究

1、分類(lèi)號(hào)』UDC5792密級(jí)編丐一—4252—04711中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院植物生理生態(tài)研究所博士后研究工作報(bào)告結(jié)核分枝桿菌rnazG功能及毒力研究工作完成時(shí)間呈Q垡生墨月報(bào)告提交時(shí)間至Q】墨璽墨且摘要我們通過(guò)比較基因組研究發(fā)現(xiàn)了Mycobacteriumtuberculosis(Mt)無(wú)毒株H37RaMazG的A219E突變。MazG屬于dNTP焦磷酸水解酶蛋白家族，能夠?qū)NTP類(lèi)物質(zhì)水解為dNMP和焦磷酸。前期研究發(fā)現(xiàn)MtM

2、azG不但能夠水解正常的(d)NTP，還有降解具有致突變作用的dUTP和8oxo—dGTP的能力，而MazG[A219E]則喪失了該水解能力，為一個(gè)功能喪失突變體。MazG被敲除Myeobacteriumsmegmatis(Ms)菌株在雙氧水處理下的存活能力比野生株顯著下降。我們認(rèn)為MazG蛋白能夠降解特定的氧化損傷型dNTP從而防止其摻入DNA導(dǎo)致錯(cuò)配和突變的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，mazG缺失的Ms在氧化條件和穩(wěn)定生長(zhǎng)期下的抗利福平白發(fā)突變

3、頻率明顯高于野生菌株；通過(guò)對(duì)抗性菌株rpoB基因的測(cè)序發(fā)現(xiàn)，mazG缺失菌株的CT突變頻率明顯高于野生菌株，提示MazG的真正底物應(yīng)該能夠?qū)е翪T突變的發(fā)生，如5OHdCTP和5CHOdUTP等。我們對(duì)這些氧化型dNTP進(jìn)行了酶促動(dòng)力學(xué)常數(shù)測(cè)定。MtMazG對(duì)5OHdCTP的‰值為19“M?；瘜W(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，向mazG缺失菌株轉(zhuǎn)化5OHdCTP后其突變頻率顯著上升，同時(shí)表現(xiàn)出劑量依賴(lài)效應(yīng)，而野生株突變頻率則無(wú)變化，說(shuō)明5OHdCT