小麥雜交種與親本之間差異表達EST的克隆和鑒定.pdf

1、許多研究表明,在雜種優(yōu)勢形成的過程中,雜交種與親本之間的基因表達發(fā)生顯著的變化.為了更深入探討小麥雜種優(yōu)勢形成的分子機理,需要對這些差異表達基因進行研究.該文以3338/京冬6號組合為材料,采用cDNA-AFLP技術(shù)對拔節(jié)期葉片和根、抽穗期旗葉、授粉后6天和授粉后12天的正反雜交的種子中差異表達基因進行了探討與研究,取得主要結(jié)果如下:1.在拔節(jié)期葉片和根、抽穗期旗葉、授粉后6天和授粉后12天的正反交種子中回收差異表達片段1001條,并按

2、照差異表達圖譜對各種差異表達類型與雜種優(yōu)勢的關(guān)系進行了探討,結(jié)果表明:1)不同時期,各種差異表達類型在總的差異表達基因片段中所占的比例不同.2)隨著生育期的不同,各種差異表達類型所占比例的變化趨勢也不盡相同.3)各生育期各組織中差異表達基因片段在總的差異表達片段所占的比例不同,這說明各生育期各組織中基因差異表達情況有所不同.2.應(yīng)用反向Northern技術(shù),對抽穗期旗葉的160個差異表達片段進行驗證,發(fā)現(xiàn)86條呈現(xiàn)表現(xiàn)真實差異,并對其中

3、32個片段進行克隆測序分析,結(jié)果表明其中22個cDNA片段與已知功能的基因有較高的同源性,相應(yīng)基因與多個生理生化途徑有關(guān):包括糖代謝(1個)、脂類代謝(3個)、蛋白質(zhì)代謝(2個)、氨基酸代謝(2個)、調(diào)控蛋白(1個)、物質(zhì)運輸(1個)、能量轉(zhuǎn)換(4個)、信號轉(zhuǎn)導(5個)、貯藏蛋白(1個)、細胞骨架系統(tǒng)(1個)、細胞分裂周期(1個).此外還有10條cDNA片段功能未知.3.利用電子克隆獲得了14-3-3蛋白基因完整的開放閱讀框(ORF).