自然突變基因分離體系的初步建立與蘋(píng)果柱型突變體類型的鑒定.pdf

1、柱型蘋(píng)果是果樹(shù)分子生物學(xué)研究和蘋(píng)果分子育種的珍貴試材,鑒定柱型突變體類型并建立適合于克隆自然突變基因的新體系是分離柱型突變基因的前提.該研究以蘋(píng)果野生型品種旭和突變型品種威賽克旭為材料,研究了柱型蘋(píng)果的突變體類型,初步建立了兩個(gè)克隆自然突變基因新體系,結(jié)果如下:1、以S1核酸酶和CELI核酸酶突變檢測(cè)法為基礎(chǔ),初步建立了兩個(gè)新體系,該體系不需要預(yù)先知道目的基因及其產(chǎn)物的序列、功能等信息,所以適合于研究自發(fā)突變基因;以定向誘變的玉米葉綠素

2、a/b結(jié)合蛋白的啟動(dòng)子為操作對(duì)象,驗(yàn)證了其原理的可行性,并在基因組水平上研究了其克隆蘋(píng)果柱型突變基因的可行性;2、優(yōu)化了S1核酸酶突變檢測(cè)體系,新體系更加穩(wěn)定、快速,適合于功能基因組學(xué)研究的要求;3、蘋(píng)果柱型突變與細(xì)胞分裂素關(guān)系密切,證據(jù)如下:(1)植物學(xué)鑒定:遮光處理威賽克旭葉片變黃說(shuō)明它不是油菜素內(nèi)酯的突變體;比較兩者的形態(tài)差異與發(fā)育的關(guān)系,證明莖粗處于突變的核心地位,而節(jié)間次之;(2)比較兩者解剖結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)突變之后中皮層加厚,細(xì)胞橫

3、向變大,數(shù)量也增加,但徑向沒(méi)有變長(zhǎng),暗示著與細(xì)胞分裂素的關(guān)系;(3)對(duì)比兩者的春梢和秋梢內(nèi)源激素含量發(fā)現(xiàn)突變之后GA3、GA4、ZR和IAA含量升高,表明柱型蘋(píng)果不是赤霉素合成突變體;4、利用蘋(píng)果GA-20氧化酶基因建立了擬南芥矮化突變體:利用RT-PCR技術(shù)從蘋(píng)果新梢中擴(kuò)增了與GA-20氧化酶基因高度同源的序列,全長(zhǎng)1.179kb;比較發(fā)現(xiàn)該基因在旭和威賽克旭間的存在一定的多態(tài)性;RNA干擾試驗(yàn)證明該基因控制營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng),是GA-20氧化