桿狀病毒早期感染對家蠶血淋巴細胞的影響以及宿主細胞的應激反應研究.pdf

1、該實驗以BmNPV-家蠶血淋巴細胞這一系統(tǒng)為研究對象,運用家兔免疫的方法獲得病毒粒子的多克隆抗體再輔助二抗標記實現(xiàn)在In vivo的條件下標記病毒粒子,建立一個In vivo的條件下利用激光共聚焦技術(shù)實時研究病毒感染的新方法.運用BmNPV的病毒粒子實時采集的家蠶血淋巴細胞感染吸附后的一個小時計為0時間,激光共聚焦實時跟蹤時間為1-3小時.跟蹤研究病毒在感染早期對于宿主細胞的鈣離子和線粒體的影響.實驗通過對正常與病毒感染細胞內(nèi)以Fluo

2、-3標記鈣離子的熒光信號的實施跟蹤,采集細胞范圍內(nèi)熒光信號數(shù)據(jù),觀察其變化過程.發(fā)現(xiàn):在正常情況下家蠶血淋巴細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化具有規(guī)則的波動性,振幅一致,周期較為恒定約為900s,且相鄰的細胞具有相同的波動特征以及良好的同步性;在病毒感染的情況下,鈣離子濃度總體上有所增加,且波動周期延長、濃度變化的靈敏度降低.說明病毒感染會影響正常條件下鈣離子有規(guī)律的釋放與聚集的過程,推測感染早期病毒攜帶的病毒編碼的糖蛋白修飾質(zhì)膜所造成的胞內(nèi)一些細

3、胞器(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等)的膜通透性損傷性改變是胞內(nèi)鈣離子濃度增加,是鈣離子聚集與釋放過程失調(diào)的主要原因.病毒依賴細胞骨架的質(zhì)-核運輸過程也是鈣離子濃度升高的一個因素.而相鄰細胞鈣離子濃度變化的一致性體現(xiàn)了通過鈣離子而實現(xiàn)的細胞間信號傳遞過程.實驗通過與研究鈣離子相同的病毒感染方式對正常與病毒感染細胞內(nèi)以Rhodamine123標記線粒體的熒光信號的實施跟蹤發(fā)現(xiàn):線粒體的膜電位在細胞正常條件下也具有規(guī)則的波動性,周期恒定約為500s,但是

4、在波形上與鈣離子的波動有著比較大的差別,而在病毒感染的條件下線粒體的活性變化具有三種不同的紊亂形式.說明線粒體的膜電位可以反映線粒體膜上呼吸鏈的狀態(tài),即體現(xiàn)了線粒體功能狀態(tài)以及活性.而其在病毒感染的條件下的三種不同的紊亂形式,體現(xiàn)了病毒與宿主細胞之間的相互作用的不同結(jié)果.推測為宿主細胞死亡、凋亡或為對病毒感染的可承受狀態(tài).綜合以上可認為病毒感染早期就會對宿主細胞的產(chǎn)能系統(tǒng)、信號傳導系統(tǒng)、保護酶系統(tǒng)產(chǎn)生一定的影響,造成宿主細胞不同的應激反