小麥Rubisco和Rubisco活化酶抗體的制備及應(yīng)用.pdf

1、在傳統(tǒng)分離方法的基礎(chǔ)上采用快流速的陰離子交換載體DEAE-TOYOPEARL-650M純化小麥Rubisco活化酶,并通過(guò)<'14>C同位素標(biāo)記法測(cè)定純化所得的Rubisco活化酶的活性.純化所得的Rubisco活化酶經(jīng)SDS-PAGE后在凝膠上出現(xiàn)分子量為41 000和45 000的兩個(gè)蛋白質(zhì)條帶,通過(guò)活性測(cè)定,證實(shí)其對(duì)Rubisco有活化作用,且ATP再生系統(tǒng)能顯著提高Rubisco活化酶的活性.以純化所得的Rubisco活化酶和該

2、實(shí)驗(yàn)室保存的Rubisco為抗原,通過(guò)皮下多點(diǎn)分次注射法免疫新西蘭大白兔以制備Rubisco及其活化酶的多克隆抗體.通過(guò)棋盤滴定法來(lái)測(cè)定兔血清中多克隆抗體的滴度并選擇其最佳的抗原抗其工作濃度.新西蘭大白兔三次經(jīng)免疫后測(cè)得其血清中Rubisco及其活化酶抗體的滴度分別為1:25600和1:51200;最佳工作濃度分別是抗原(Rubisco)濃度0.95μg·ml<'-1>,其相應(yīng)的多克隆抗血清的滴度為1:800;抗原(Rubisco活化酶

3、)的濃度為0.88μg·ml<'-1>,其相應(yīng)的多克隆抗血清的滴度為1:1600.對(duì)兩個(gè)不同品種的盆栽小麥進(jìn)行不同光照和施氮水平處理,并提取其粗酶液,按照上述最佳工作濃度分別稀釋該粗酶液以及相應(yīng)的多克隆抗體,通過(guò)ELISA測(cè)定小麥葉片中的Rubisco及其活化酶含量.用同樣的方法測(cè)定抽穗期小麥不同葉位的葉片以及玉米、蠶豆和油菜中Rubisco及其活化酶的含量.得到如下結(jié)果:①光對(duì)Rubisco蛋白合成具有促進(jìn)作用;長(zhǎng)時(shí)間弱光照適應(yīng)之后再

4、進(jìn)行強(qiáng)光照片理,其葉片中Rubisco含量的增加值和增加幅度均大于連續(xù)27h暗適應(yīng)后再經(jīng)強(qiáng)光處理的增加值和增加幅度;活化酶含量亦隨光強(qiáng)和光照時(shí)間的增加而逐漸上升,只是趨勢(shì)沒(méi)有Rubisco那么明顯;②高氮處理的小麥兩酶含量高于低氮處理;③玉米因?yàn)槭荂<,4>作物,所以其體內(nèi)兩酶的含量不如C<,3>作物蠶豆和油菜高;④對(duì)于抽穗期的揚(yáng)麥158,其葉片體內(nèi)Rubisco及活化酶含量會(huì)隨葉位的降低而減少;⑤葉綠素含量的變化情況與不同處理植株體內(nèi)