綠竹B類基因克隆與功能初步分析.pdf

1、MADS-box基因家族在決定花分生組織特性和花器官發(fā)育過程中起著重要的作用。AP3基因作為MADS-box基因家族的一員，調(diào)控花瓣和雄蕊的發(fā)育。本文以綠竹(Bambusa oldhamii)開花試管苗花芽為植物材料，采用cDNA末端快速擴增技術(shù)(rapid amplification of cDNA ends，RACE)技術(shù)，獲得了1條AP3-like基因，命名為BoAP3。通過熒光定量PCR分析其在花芽和葉芽中的相對表達，并構(gòu)建植物

2、表達載體。利用前期cDNA文庫篩選得到的BoPI基因構(gòu)建不同長度的pGBKT7-BoPI和pGADT7-BoAP3載體，研究BoAP3和BoPI蛋白的相互作用，主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)獲得了BoAP3基因的cDNA序列998bp，包括654bp的完整ORF編碼區(qū)，編碼218個氨基酸。對該基因編碼的蛋白質(zhì)進行結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)該蛋白具有典型植物MADS-box轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)域，包括MADS區(qū)、I區(qū)、K區(qū)、C區(qū)，屬于MADS-bo

3、x基因;通過生物信息學(xué)分析推測其為AP3基因的同源基因，可能具有B類基因的功能;成功構(gòu)建了BoAP3基因植物表達載體。
　　 (2)實時定量PCR結(jié)果表明:BoAP3在花芽中表達量明顯高于營養(yǎng)芽，是營養(yǎng)芽的8.1倍，表明該基因參與了綠竹花器官的發(fā)育。
　　 (3)對pGBKT7和pGADT7重組質(zhì)粒進行自激活檢測，發(fā)現(xiàn)沒有激活報告基因，無自激活作用發(fā)生;通過SD/-Leu-Trp-His-Ade培養(yǎng)基篩選得到pGBKT7