Xist基因調控及對牛SCNT早期胚胎發(fā)育的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、Xist是產生一個非編碼RNA的與X染色體相關的基因,它是在合子期基因組開始激活,并且是胚胎早期發(fā)育表達的第一個印記基因。盡管Xist是在雌性動物中參與X染色體失活,但Xist RNA的功能尚未被完全認知。在動物克隆胚胎發(fā)育中許多基因表達異常,Xist也是這些異常表達基因之一。前期研究表明,利用Xist基因缺陷型供體細胞用于克隆實驗,可成功將小鼠克隆效率提高8-9倍。本實驗探討了TALER載體轉染到胎牛成纖維細胞調控ist基因表達的可行

2、性,并且以抑制Xist基因表達的細胞作為供體制作克隆胚胎,研究Xist基因調控對??寺∨咴缙诎l(fā)育影響。實驗結果顯示,本實驗設計特異性抑制Xist表達載體TALER轉染雌性胎牛成纖維細胞,并用mCherry作為載體轉染效率檢測的報告基因。通過流式細胞儀進行分選獲得陽性細胞后直接提取RNA,反轉錄擴增cDNA,與同一來源細胞系進行Real time RT-PCR對Xist表達水平檢測,結果發(fā)現(xiàn)實驗組細胞ist相對表達量下調93.85%,說明

3、本實驗設計的載體轉染系統(tǒng)能夠有效限制Xist基因的表達。選取ist基因抑制表達陽性的轉染細胞用于體細胞核移植實驗,同時用未經處理的細胞作為對照,實驗組和對照組的卵裂率、8細胞發(fā)育率、桑葚胚發(fā)育率和囊胚發(fā)育率分別為78.8% vs75.1%(P>0.05,無顯著差異)、54.4% vs50.6%(P>0.05,無顯著差異)、12.3% vs27.8%(P<0.01,差異極顯著)、0 vs26.6%(P<0.01,差異極顯著)。上述實驗結果

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