Xist基因調控及對牛SCNT早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、Xist是產生一個非編碼RNA的與X染色體相關的基因，它是在合子期基因組開始激活，并且是胚胎早期發(fā)育表達的第一個印記基因。盡管Xist是在雌性動物中參與X染色體失活，但Xist RNA的功能尚未被完全認知。在動物克隆胚胎發(fā)育中許多基因表達異常，Xist也是這些異常表達基因之一。前期研究表明，利用Xist基因缺陷型供體細胞用于克隆實驗，可成功將小鼠克隆效率提高8-9倍。本實驗探討了TALER載體轉染到胎牛成纖維細胞調控ist基因表達的可行

2、性，并且以抑制Xist基因表達的細胞作為供體制作克隆胚胎，研究Xist基因調控對?？寺∨咴缙诎l(fā)育影響。實驗結果顯示，本實驗設計特異性抑制Xist表達載體TALER轉染雌性胎牛成纖維細胞，并用mCherry作為載體轉染效率檢測的報告基因。通過流式細胞儀進行分選獲得陽性細胞后直接提取RNA，反轉錄擴增cDNA，與同一來源細胞系進行Real time RT-PCR對Xist表達水平檢測，結果發(fā)現(xiàn)實驗組細胞ist相對表達量下調93.85％，說明

3、本實驗設計的載體轉染系統(tǒng)能夠有效限制Xist基因的表達。選取ist基因抑制表達陽性的轉染細胞用于體細胞核移植實驗，同時用未經處理的細胞作為對照，實驗組和對照組的卵裂率、8細胞發(fā)育率、桑葚胚發(fā)育率和囊胚發(fā)育率分別為78.8％ vs75.1％（P＞0.05，無顯著差異）、54.4％ vs50.6％（P＞0.05，無顯著差異）、12.3％ vs27.8％(P＜0.01，差異極顯著）、0 vs26.6％（P＜0.01，差異極顯著）。上述實驗結果