PEG11基因在自然繁殖牛和體細(xì)胞核移植牛中印記及DNA甲基化分析.pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)(somatic cell nuclear transfer，SCNT)，又稱(chēng)體細(xì)胞克隆技術(shù)，在醫(yī)療、農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)等諸多領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價(jià)值。盡管體細(xì)胞核移植已經(jīng)在多種哺乳動(dòng)物中獲得成功，但克隆效率仍然很低，只有2-5％的成活率，即使是存活下來(lái)的克隆動(dòng)物也多伴有器官發(fā)育異常，這些制約了體細(xì)胞核移植技術(shù)的廣泛應(yīng)用。在體細(xì)胞核移植過(guò)程中，體細(xì)胞核放棄已有的高度分化的體細(xì)胞模式，進(jìn)行重編程形成全能性的胚胎模式，此過(guò)程稱(chēng)為表觀重

2、編程。目前認(rèn)為，供體核的不完全重編程導(dǎo)致在發(fā)育過(guò)程中有重要作用的基因異常表達(dá)或沒(méi)有表達(dá)是克隆效率低下的主要原因?；蚪M印記是由表觀修飾導(dǎo)致的基因表達(dá)具有親本特異性，而DNA甲基化是調(diào)控基因組印記的一種主要表觀修飾方式。我們選擇在胚胎和胚盤(pán)發(fā)育中有重要作用的DLK1-D1O3印記域的PEG11印記基因進(jìn)行研究。
　　 通過(guò)PCR-SSCP方法在PEG11基因894nt位置找到一個(gè)SNP位點(diǎn)(A/G)，用于等位基因特異基因表達(dá)和DN

3、A甲基化狀態(tài)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在自然繁殖牛的心、肝、脾、肺、腎、肌肉和脂肪7個(gè)組織中均表達(dá)，并且表現(xiàn)為單等位基因(G)。為了確定基因內(nèi)DNA甲基化是否調(diào)控基因的印記表達(dá)，應(yīng)用亞硫酸鹽方法分析了在該基因內(nèi)部的54個(gè)CG位點(diǎn)的等位基因特異的甲基化狀態(tài)。結(jié)果顯示，兩條親本鏈（A-鏈和G-鏈）均表現(xiàn)為高度甲基化(＞96％)，并且鏈間甲基化水平無(wú)顯著差異(P＞0.05)，說(shuō)明所分析位置的甲基化沒(méi)有參與調(diào)控PEG11基因。
　　 分析PEG1

4、1基因體細(xì)胞核移植牛組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，PEG11基因在心、肝、脾、腎、肌肉和脂肪6個(gè)組織中都是單等位基因表達(dá)(G)，但是肺臟中發(fā)生印記紊亂。我們對(duì)表現(xiàn)為雙等位基因表達(dá)(A/G)的肺臟進(jìn)行等位基因特異的甲基化狀態(tài)分析，在體細(xì)胞核移植牛中也呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)，與自然繁殖牛無(wú)顯著差異(P＞0.05)，且兩條鏈間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，結(jié)果進(jìn)一步證明PEG11基因內(nèi)部的DNA甲基化沒(méi)有調(diào)控印記基因的表達(dá)。盡管DNA甲基化對(duì)印記表達(dá)沒(méi)有調(diào)控作用