日本凋毛藻表達(dá)序列標(biāo)記及南極衣藻分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文日本凋毛藻表達(dá)序列標(biāo)記及南極衣藻分子系統(tǒng)學(xué)研究姓名：劉晨臨申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)成黃曉航20040610日本凋毛藻表達(dá)序列標(biāo)記及南極衣藻分子系統(tǒng)學(xué)研究基相結(jié)合。同時還研究了真核捕光蛋白的系統(tǒng)發(fā)生學(xué)。葉綠素鼢和葉綠素加結(jié)合的LHC蛋白部分成兩大部分。葉綠素n／6結(jié)合的LHC分枝中主要包括綠藻和綠色植物，而不包含其它雜色藻。葉綠素砒分支中，日本凋毛藻的6條LHC蛋白序列并沒有聚類在一起，同時

2、其它雜色藻，例如硅藻、褐藻、隱藻等的不同類型的LHC也沒有聚類在一起。分離了1條日本凋毛藻的硫氧還蛋白(thioredoxin，TRX)基因，發(fā)現(xiàn)它與其它藻類TRX基因的相似性都較低，只有活性位點處WCGPC完全一致。推測GjTRXl屬于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分布的硫氧還蛋白。編碼的TRX蛋白有153個氨基酸。GjTRXleDNA序列推導(dǎo)出多肽的二級結(jié)構(gòu)單元，與以往報道的傳統(tǒng)上保守的TRX的二級結(jié)構(gòu)單元類型相一致，但是順序有很所不同。克隆到2條碳酸酐

3、酶(carbonanhydrase，CA)cDNA，命名為GjCAl和GiCA2，分別屬于旺一CA和B—CA。GjCAl編碼289個氨基酸的完整序列：GjCA2編碼的192個氨基酸包含了大部分的CA序列。將GiCAl與其它物種的CA酶序列比較，3個與Zn結(jié)合的組氨酸活性位點處高度保守。a—CA酶系統(tǒng)樹中，日本凋毛藻的Ⅱ一CA酶同海帶、衣藻等藻類分支聚類。GjCA2與其它物種的p—CA的多肽序列比對，序列中與Zn原子結(jié)合的或相向的氨基酸位

4、點的保守性極高。在B—CA酶的系統(tǒng)樹中，植物聚類在一起；藻類除衣藻和日本凋毛藻外都聚類在一起，日本凋毛藻與這些植物和藻類分支以65％的自舉值聚類?？寺〉?個多聚遍在蛋白(ubiquitin，Ub)基因，分別命名為GjUbl和qUb2。GjUbl編碼一個由3個ub單體構(gòu)成的多聚遍在蛋白，每個單體由76個氨基酸組成。GjUb2包含2個單體。單體的結(jié)構(gòu)與從其它紅藻中分離到的多聚ub的單體結(jié)構(gòu)完全一致。同時還分離到一條Ub結(jié)合酶(132)eDN

5、A序列GjUbcl，編碼147個氨基酸的ub結(jié)合酶完整序列。是目前報道的在紅藻中發(fā)現(xiàn)的唯一的ub結(jié)合酶基因。與不同物種中的E2酶序列進(jìn)行比較，GjUbcl與酵母E2的相似性最高，為87％；與果蠅和人類中該類型的ub結(jié)合酶的相似性也很高，這是一類普遍存在的高度保守的Ub結(jié)合酶。通過分析日本凋毛藻中的以上這5種基因，進(jìn)一步表NEST技術(shù)在篩選新功能基因中的強大功效。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行基因的功能研究，可以更深入和廣泛地掌握該物種的遺傳學(xué)和生理生