利用液體飼囊技術比較B和Q型煙粉虱的取食行為和RNA干擾效果.pdf

1、煙粉虱Bemisia tabaci是世界上非常重要的農(nóng)作物害蟲之一，有很多生物型，其中B型和Q型煙粉虱是我國乃至世界范圍內(nèi)分布最廣泛、為害最嚴重且防治困難的兩種生物型。研究B型和Q型煙粉虱的取食行為、適應能力等方面的差異，對于探討煙粉虱的成災機理、制定安全有效的防治措施有重要的理論和實際意義。本論文以液體飼囊(liquid diet sac，LDS)技術為基礎，利用刺吸電位(electrical penetration graph，EP

2、G)技術研究兩種煙粉虱生物型的取食行為，利用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術研究P450 CYP6CM1基因的干擾效果，期望在一定程度比較B和Q型煙粉虱成災能力的差異，為不同遺傳背景的生物型種群制定針對性的防治措施提供依據(jù)，同時探索建立評價次生物質(zhì)對刺吸式昆蟲影響的技術體系。本研究取得的主要結果如下:
　　(1)利用EPG技術測定煙粉虱對成分不同LDS的取食行為，定量研究不同濃度煙堿對煙粉虱取食行為的影

3、響。明確煙堿對B型和Q型煙粉虱取食行為的影響，比較B型和Q型煙粉虱取食行為的差異，并據(jù)此建立一套利用刺吸電位(electrical penetration graph，EPG)結合液體飼囊(liquiddiet sac，LDS)(EPG+LDS)研究次生物質(zhì)對煙粉虱取食行為影響的指標體系。結果表明，利用植物作對照，比較5％、10％和15％蔗糖溶液對煙粉虱取食波形的影響，10％蔗糖濃度下煙粉虱EPG波形的相對振幅、頻率與其在植物上的行為最

4、為相近，因此對于LDS指標，10％的蔗糖溶液更適合用于不同生物型煙粉虱取食行為的EPG研究。在10％蔗糖溶液中加入煙堿，隨著煙堿濃度的升高，煙粉虱取食波形的持續(xù)時間呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢，且0.001％的煙堿濃度即可顯著延長煙粉虱的刺探時間并顯著抑制E1波和E2波的持續(xù)時間。高濃度煙堿條件下，E2波被完全抑制。雖然B和Q型煙粉虱在多個刺探過程的EPG指標上差異不顯著，但與吸食相關的幾個指標差異顯著，Q型煙粉虱E2波持續(xù)時間無論在無煙堿環(huán)境下

5、還是較低煙堿環(huán)境下都顯著長于B型煙粉虱，Q型煙粉虱對煙堿具有更強的適應能力。在EPG波形指標上，C波持續(xù)總時間、E1波持續(xù)總時間及E2波持續(xù)總時間等是EPG+LDS技術體系較為重要的行為指標。
　　(2)已有研究證明煙粉虱的P450 CYP6CM1基因在煙粉虱對新煙堿類殺蟲劑的抗性中有著重要作用。利用RNAi技術結合LDS，將體外合成的B型和Q型煙粉虱P450 CYP6CM1基因相對應的dsRNA通過飼喂的方法導入到煙粉虱成蟲體內(nèi)

6、，通過比較dsRNA在不同飼喂?jié)舛燃安煌曃箷r間時，對靶標基因相對表達量的影響和對兩個生物型煙粉虱校正死亡率的影響，進一步研究P450CYP6CM1基因在煙粉虱抵御煙堿或新煙堿類殺蟲劑過程中的重要作用，從而為利用RNA干擾技術進行害蟲防治提供理論基礎。結果表明，飼喂P450CYP6CM1B或P450CYP6CM1vQ基因相應的dsRNA時顯著抑制了靶標基因的表達和B和Q型煙粉虱的存活情況。隨著取食時間和dsRNA濃度的加大，靶標基因mR

7、NA相對表達水平均呈現(xiàn)下降的趨勢，兩個生物型煙粉虱的校正死亡率多有增加的趨勢;飼喂dsRAN濃度越大，目標基因的相對表達量下降趨勢越明顯，到達某一飼喂時間或者某一飼喂?jié)舛群螅S著飼喂時間和濃度的進一步增加，目標基因的相對表達量下降趨勢明顯減緩，或表現(xiàn)為差異不顯著;在較高飼喂天數(shù)時B型煙粉虱的校正死亡率均顯著高于Q型。
　　(3)觀察記錄飼喂20μg/ml dsRNA兩天后，煙粉虱在0.001％煙堿飼料上的存活情況。結果顯示，對煙粉