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文檔簡介
1、大豆是需磷較多的作物,但土壤磷多以植物不能直接吸收利用的有機態(tài)存在,有效態(tài)磷嚴重缺乏。本研究在分析大豆轉化影響因素基礎上,采用農桿菌介導與花粉管通道轉化技術將酸性磷酸酶GmPAP4和耐低磷轉錄因子AtPHR1轉化不同大豆品種,創(chuàng)制耐低磷轉基因新種質,并對轉基因材料進行耐低磷特性評價。研究結果為大豆遺傳轉化提供技術支撐,為耐低磷新品種培育奠定物質基礎。主要結果如下:
1.優(yōu)化了大豆農桿菌介導遺傳轉化體系。以萌發(fā)5d大豆幼苗制
2、備子葉節(jié)外植體,預培養(yǎng)1d,農桿菌菌株為EHA105,菌液OD600為0.7,侵染液OD600為0.5或0.7進行轉化,100 mg/L卡那霉素篩選的抗性芽誘導率最高;轉化率最高的品種是五星2號,其轉化率為2%。
2.利用農桿菌介導轉化技術將酸性磷酸酶GmPAP4、轉錄因子AtPHR1轉入大豆,獲得了11份轉基因新種質。其中,JD12-GmPAP4T5代47株,T4代19株,蒙9793-1-GmPAP4 T1代23株,LG
3、D1-GmPAP4 T1代6株,WX2-GmPAP4T1代3株,SD4-GmPAP4 T2代5株;JD17-AtPHR1 T3代1株,WX2-AtPHR1 T2代14株,JD12-AtPHR1T1代7株,LGD1-AtPHR1 T1代6株,JD7-AtPHR1 T1代4株;通過混合菌株共轉化技術將GmPAP4與AtPHR1轉入同一品種,獲得3株轉有2個目的基因的T1植株。
3.采用花粉管通道轉化技術將GmPAP4、AtPH
4、R1轉入不同品種。中黃41、綏農14與中黃15的轉化后結莢率較高;獲得了轉GmPAP4的T2代SN14-GmPAP429株(9個株系),ZH15-GmPAP411株(1個株系),JD17-GmPAP44株(2個株系);獲得了轉GmPAP4無載體、無標記線性片段T0代JD12-GmPAP4陽性植株17株;轉有無標記載體PX6-AtPHR1的ZH41-AtPHR1的T2材料6株(3個株系)。
4.分析了轉GmPAP4大豆新材料
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