大白菜BrTCP24基因克隆及功能分析.pdf

1、TCP家族轉(zhuǎn)錄因子是植物所特有的，它含有一種特有的bHLH保守結(jié)構域。植物的葉片彎曲以及大小都可能受到TCP基因家族的影響。本試驗從大白菜自交系福山包頭中分離了擬南芥(Arabidopsisthaliana)TCP的同源基因，命名為BrTCP24，并構建了BrTCP24基因的植物表達載體。將該基因轉(zhuǎn)入擬南芥，獲得了相應的純合轉(zhuǎn)基因植株，對轉(zhuǎn)基因植株與野生型的表型性狀進行觀察比較，并且在生物信息學方面對BrTCP24基因做了相關分析。主要

2、結(jié)果如下:
　　 1.BrTCP24基因的克隆
　　 擴增出一條分子質(zhì)量約為1200bp的條帶，經(jīng)測序，該片段為1221bp，與預期的目的片段大小一致。經(jīng)PCR、酶切及測序驗證，證明BrTCP24基因片段已經(jīng)連接到植物表達載體pCAMBIA2300上。
　　 2.PCR鑒定轉(zhuǎn)基因擬南芥
　　 采用根癌農(nóng)桿菌介導的浸花法侵染擬南芥，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。提取轉(zhuǎn)基因擬南芥總RNA，并成功擴增到外源BrTCP24基

3、因。
　　 3.氨基酸序列分析
　　 對BrTCP24基因所編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列進行比對分析，結(jié)果表明大白菜BrTCP24蛋白質(zhì)與擬南芥AtTCP4蛋白質(zhì)的氨基酸序列的一致性為77.57％，核酸的一致性為77.15％。
　　 4.BrTCP24基因過量表達可能抑制了與器官大小有關的基因表達
　　 通過半定量RT-PCR檢測了跟器官體積大小有關的基因AtEXP10，還有與細胞分裂有關的基因AtCYCD3;

4、1，AtG1F1和AtGRF5。與對照擬南芥相比，轉(zhuǎn)基因擬南芥中AtEXP10，AtCYCD31,AtGIF1和AtGRF5基因的表達水平減弱。這些結(jié)果表明在擬南芥的發(fā)育過程中，BrTCP24基因的過量表達可能抑制了與器官大小有關的基因的表達從而使擬南芥器官變小。
　　 5.轉(zhuǎn)基因植株的性狀觀察
　　 在含Kn的1/2MS培養(yǎng)基上，篩選植株暗處理7天，同時篩選5株長勢好的植株，將其移入新的培養(yǎng)基和培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)兩周，觀