PCV2感染對仔豬肝臟MyD88-NF-κB信號途徑的影響.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是導(dǎo)致豬圓環(huán)病毒病的主要病原，造成機(jī)體發(fā)生急性期反應(yīng)，引起肝臟中急性期蛋白合成和血清中急性期蛋白濃度的變化。本實(shí)驗(yàn)在復(fù)制仔豬PCV2感染模型的基礎(chǔ)上，通過對仔豬肝臟中髓樣分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)及其相關(guān)蛋白的研究，探討MyD88-NF-κB信號途徑與急性期蛋白的關(guān)系，從而為臨床上PCV2相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)理和防治提供理論基礎(chǔ)。
　　 選取31頭經(jīng)檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV2)、

2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗原和抗體均為陰性的5周齡斷奶仔豬，隨機(jī)分為對照組16頭和PCV2攻毒組15頭，并于攻毒當(dāng)天剖殺4頭對照組仔豬，采集肝臟，然后于14d、21d、35d分別剖殺4頭對照組仔豬和5頭攻毒組仔豬，采集肝臟。運(yùn)用蛋白提取法分別提取細(xì)胞核蛋白和胞漿蛋白，Western blot定量檢測細(xì)胞核中NF-κB/P65和細(xì)胞漿中p-IκBα、MyD88蛋白含量的變化，電泳遷移率(EMSA)法檢測細(xì)胞核中NF-κB與DN

3、A的結(jié)合率。Westernblot檢測結(jié)果表明，攻毒后胞核中NF-κB/p65的蛋白含量逐漸增加，并在14d、21d明顯高于0d和同時(shí)間點(diǎn)對照組(P＜0.05)，21d時(shí)達(dá)到峰值，攻毒后35d NF-κB/p65的蛋白含量有所下降。EMSA試驗(yàn)結(jié)果表明，攻毒后14d、21d，胞核中NF-κB與DNA的結(jié)合率明顯高于0d和35d，與同時(shí)間點(diǎn)對照組相比結(jié)合率顯著增加(P＜0.05)，PCV2攻毒后21d NF-κB與DNA的結(jié)合率最高。胞漿

4、中p-IκBα、MyD88蛋白Western blot檢測結(jié)果，p-IκBα在攻毒后含量先升高后趨于恢復(fù)，并于21d達(dá)到最高，與同時(shí)間點(diǎn)對照組相比，21d增加顯著(P＜0.05)，其他時(shí)間變化不顯著;攻毒后仔豬肝臟MyD88含量亦是先升高后降低，并于21d達(dá)到高峰，與同時(shí)間點(diǎn)對照組相比，14d、21d增加顯著(P＜0.05)。結(jié)果表明，PCV2可通過激活MyD88啟動(dòng)NF-κB信號途徑;通過IκBα的磷酸化降解激活NF-κB/p65蛋白

5、，促進(jìn)NF-κB/p65進(jìn)行核易位，使NF-κB與DNA發(fā)生結(jié)合，調(diào)控相關(guān)炎性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。
　　 我們實(shí)驗(yàn)室曾對正常仔豬進(jìn)行人工感染PCV2，采用熒光定量PCR檢測的肝臟APP mRNA，采用ELISA方法檢測血清中APPs蛋白含量;并將此次實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果與上述結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示:MyD88與NF-κB/P65之間顯著相關(guān)(P＜0.05)，相關(guān)系數(shù)0.566，說明MyD88是激活NF-κB/P65信號通路的重要

6、介導(dǎo)者;NF-κB/P65與SAA、Pig-MAP之間有相關(guān)性(P＜0.05)，相關(guān)系數(shù)分別為0.669和0.471，而與CRP、AAG、HP、ApoA-Ⅰ之間相關(guān)性不明顯(P＞0.05)，說明NF-κB/P65對SAA、Pig-MAP的產(chǎn)生具有明顯的調(diào)控作用;MyD88、p-IκBα與肝臟APPs mRNA和血清中APPs的分析結(jié)果顯示，它們之間相關(guān)性不顯著(P＞0.05)，說明MyD88、p-IκBα對APPs的調(diào)控需要通過NF-κ