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文檔簡介
1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是導致豬圓環(huán)病毒病的主要病原,造成機體發(fā)生急性期反應,引起肝臟中急性期蛋白合成和血清中急性期蛋白濃度的變化。本實驗在復制仔豬PCV2感染模型的基礎上,通過對仔豬肝臟中髓樣分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)及其相關蛋白的研究,探討MyD88-NF-κB信號途徑與急性期蛋白的關系,從而為臨床上PCV2相關疾病的發(fā)生機理和防治提供理論基礎。
選取31頭經(jīng)檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV2)、
2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗原和抗體均為陰性的5周齡斷奶仔豬,隨機分為對照組16頭和PCV2攻毒組15頭,并于攻毒當天剖殺4頭對照組仔豬,采集肝臟,然后于14d、21d、35d分別剖殺4頭對照組仔豬和5頭攻毒組仔豬,采集肝臟。運用蛋白提取法分別提取細胞核蛋白和胞漿蛋白,Western blot定量檢測細胞核中NF-κB/P65和細胞漿中p-IκBα、MyD88蛋白含量的變化,電泳遷移率(EMSA)法檢測細胞核中NF-κB與DN
3、A的結合率。Westernblot檢測結果表明,攻毒后胞核中NF-κB/p65的蛋白含量逐漸增加,并在14d、21d明顯高于0d和同時間點對照組(P<0.05),21d時達到峰值,攻毒后35d NF-κB/p65的蛋白含量有所下降。EMSA試驗結果表明,攻毒后14d、21d,胞核中NF-κB與DNA的結合率明顯高于0d和35d,與同時間點對照組相比結合率顯著增加(P<0.05),PCV2攻毒后21d NF-κB與DNA的結合率最高。胞漿
4、中p-IκBα、MyD88蛋白Western blot檢測結果,p-IκBα在攻毒后含量先升高后趨于恢復,并于21d達到最高,與同時間點對照組相比,21d增加顯著(P<0.05),其他時間變化不顯著;攻毒后仔豬肝臟MyD88含量亦是先升高后降低,并于21d達到高峰,與同時間點對照組相比,14d、21d增加顯著(P<0.05)。結果表明,PCV2可通過激活MyD88啟動NF-κB信號途徑;通過IκBα的磷酸化降解激活NF-κB/p65蛋白
5、,促進NF-κB/p65進行核易位,使NF-κB與DNA發(fā)生結合,調(diào)控相關炎性細胞因子的轉(zhuǎn)錄和表達。
我們實驗室曾對正常仔豬進行人工感染PCV2,采用熒光定量PCR檢測的肝臟APP mRNA,采用ELISA方法檢測血清中APPs蛋白含量;并將此次實驗所得結果與上述結果進行相關性分析。結果顯示:MyD88與NF-κB/P65之間顯著相關(P<0.05),相關系數(shù)0.566,說明MyD88是激活NF-κB/P65信號通路的重要
6、介導者;NF-κB/P65與SAA、Pig-MAP之間有相關性(P<0.05),相關系數(shù)分別為0.669和0.471,而與CRP、AAG、HP、ApoA-Ⅰ之間相關性不明顯(P>0.05),說明NF-κB/P65對SAA、Pig-MAP的產(chǎn)生具有明顯的調(diào)控作用;MyD88、p-IκBα與肝臟APPs mRNA和血清中APPs的分析結果顯示,它們之間相關性不顯著(P>0.05),說明MyD88、p-IκBα對APPs的調(diào)控需要通過NF-κ
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